DNA合成常见问题

在体外人对双链DNA分子合成的技术，即是基因合成，不同于寡核苷酸合成：寡核苷酸是单链的，大约100nt为其所可以合成的Z长片段。基因合成却是双链DNA分子合成，50bp-12 kb是可以合成的长度范围。

DNA合成常见问题

怎样按照使用浓度溶解引物?

 记住几个参数:

1OD引物干粉约为33微克;

碱基的平均分子量为324.5;

引物的分子量=碱基数x碱基的平均分子量;

引物的摩尔数=质量数/引物分子量

真空干燥的DNA呈干膜状或粉末状在离心管底部,开启瓶盖时小心不要丢失;请加入足量的水充分振荡溶解。

如何保存引物?

我们提供的干粉DNA从有机溶剂中干燥出来,无菌,无核酸酶。可以室温或-20C密闭长期保存;溶解以后的DNAZ好保存在-200C,溶解引物的水的PH要求大于7,并且无菌。带有荧光标记的引物请注意避光保存。

已经溶解的引物,为什么原先使用正常,而过一段时间再使用就不好了?

如果您溶解引物的水PH过低或污染了菌或核酸酶,会使引物降解。不少实验室用的双蒸水PH<6,使用时没有充分解冻振荡混合,液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。

如何测定引物的OD值?

用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的光密度来定量。请注意紫外分光光度计的使用,测定时溶液的光密度Z好稀释到0.2-0.8之间DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后,取部分溶液稀释到1ml并在1m标准比色杯中测定其光密度,即为所测体积的OD值,进而可以计算出母液的OD值。

如何检测引物的纯度?

实验室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳。取0.2-0.5OD的引物,用尿素饱和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到饱和,上样前加热变性。加入尿素的目的一是变性二是增加样品比重,容易加样。600V电压进行电泳,一定时间后(约2-3小时),剥胶,用荧光TLC板在紫外灯下检测带型,在主带之下没有杂带,说明纯度是好的。(有时由于变性不充分,主带之上可能会有条带,乃是引物二级结构条带。)