流式细胞仪荧光相关知识介绍

概念

当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；很多荧光物质一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。

原理

光照射到某些原子时，光的能量使原子核周围的一些电子由原来的轨道跃迁到了能量更高的轨道，即从基态跃迁到diyi激发单线态或第二激发单线态等。diyi激发单线态或第二激发单线态等是不稳定的，所以会恢复基态，当电子由diyi激发单线态恢复到基态时，能量会以光的形式释放，所以产生荧光。

荧光是物质吸收光照或者其他电磁辐射后发出的光。大多数情况下，发光波长比吸收波长较长，能量更低。但是，当吸收强度较大时，可能发生双光子吸收现象，导致辐射波长短于吸收波长的情况发生。当辐射波长与吸收波长相等时，既是共振荧光。

与流式细胞仪相关的荧光术语

MESF等量可溶性荧光分子：

国际标准单位，用来衡量荧光强度。

自发荧光：

细胞或者粒子在激发照射下会发出各种波长的荧光。

流式细胞仪精度：

分析白细胞要求精度在600MESF之内，分析其他的细胞和粒子则需要更加高的精度（200MESF）。

常见荧光染料种类

365nm紫外光激发

DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）：蓝色 455nm。

488nm蓝色激光激发

FITC（异硫氰酸荧光素）：绿色 530nm。

PE（藻红蛋白）：橙黄色 575nm。

PE-Cy5（PE的衍生物）：红色 665nm。

PerCP（多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物）：红色 675nm。

PI（碘化丙啶）：橙红色 620nm。

532nm绿色激光激发

PE（藻红蛋白）：橙黄色 575nm。

PE-Dy647（PE的衍生物）：红色 647nm。

PE-Cy5（PE的衍生物）：红色 665nm。

637nm红色激光激发

APC（别藻红蛋白）：红色 665nm。

APC-Cy5（别藻红蛋白的衍生物）：深红色 710nm。