蛋白质纯化方法-层析方法

蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛，是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质，一些含量十分丰富，一些仅含有几个拷贝。为了研究某一个蛋白质，必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来。

1.离子交换层析

离子交换层析进行在由液体作为流动相，由离子交换剂作为固定相。基质、电荷基团和反离子构成了离子交换剂。主要是利用离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用或者是通过离子交换方式进行离子交换剂与离子化合物或水溶液中离子的反应。

2.分子筛层析

凝胶过滤又称为分子筛层析，因为凝胶具有网状结构，大分子物质会被排除在外部，小分子物质却可以进入其内部。当从凝胶过滤层析柱通过一混合溶液的时候，根据不同分子量筛分开了溶液中的物质。

3、聚酰胺薄膜层析

因为聚酰胺可以和分离物之间形成氢键，所以聚酰胺对极性物质具有吸附作用。被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小取决于形成氢键的强弱。层析时，在聚酰胺膜表面，展层剂与被分离物相互竞争，使得氢键形成。所以，对展层剂进行适当的展层剂，是被分离物发生的吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程在聚酰胺膜表面连续进行，就可以引起物质分离，从而使得分离目的达到。

4、吸附柱层析

吸附柱层析是指一种将缓冲液或者有机溶剂作为流动相，将固体吸附剂作为固定相使得柱构成的层析方法。

5、薄层层析

薄层层析是指一种将液体作为流动相，将在涤纶片或者玻板等载体上涂布的基质作为固定相的层析方法。此种层析方法是在载体上涂布吸附剂等物质使得薄层形成，之后根据纸层析操作展层。