总RNA提取方法

核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在环境微生物检测、食品安全检测、输血安全、法医学鉴定、疾病控制ZX、临床疾病诊断、生物学研究以及畜牧业等多种领域得到广泛地应用。下面就让小编带你了解一下总RNA提取方法。

原理

在中性条件下，核酸由于磷酸基解离而带负电荷，这一部分因为水化而在水中溶解。但是，在酸性条件下，磷酸基的负电荷消失，水溶性降低。所以，经过酸性酚的处理，DNA移向酚层，而RNA有亲水性移向水层。

异硫氰酸胍以及苯酚为TRlzol试剂中的主要成分，其中，异硫氰酸胍能够将细胞裂解，对解离蛋白体起到促进作用，分离蛋白质和RNA，并且在溶液中释放RNA。当将氯仿加入时，它能够进行酸性苯酚的抽提，而酸性苯酚能够对RNA进入水相起到促进作用，离心之后能够使水相层和有机层形成，如此，就能够分离开依然留在有机相中的DNA和蛋白质与RNA。有几层主要为DNA和蛋白质，水相层为RNA。

实验准备

1.器材

凝胶成像系统、电泳设备、电子天平、马克笔、定时器、移液器、紫外分光光度计、酒精喷雾、台式高速离心机、微波炉、锥形瓶、试剂瓶、量筒等。

2.耗材

一次性手套、一次性口罩、各规格Tip、1.5毫升EP管。

3.试剂

DEPCH2O、75％乙醇、异丙醇、氯仿、TRLZOL

4.实验材料

新鲜细胞

去除RNase污染

1.操作时，穿实验服、戴手套、口罩以及帽子。

2.使用专用器械、专用RNA操作室。

3.试剂处理：新开无水乙醇、氯仿、异丙醇后RNA专用。配制75％酒精使用0.1％DEPC水。

4.塑料器皿处理：先使用0.1％DEPC水溶液将其浸泡过夜，之后再使用高温高压灭菌。

5.玻璃器皿处理：必须在200摄氏度下烘烤量筒、试剂瓶等玻璃器皿超过2h。

样本准备

血液样本

将淋巴细胞从新鲜血液中分离出来，待用或者将TRlzol加入后在-80摄氏度下将细胞沉淀冻存起来。

细胞样本

新鲜收集，待用或者将TRlzol加入后在-80摄氏度下将细胞沉淀冻存起来。

植物或者动物组织样本

新鲜取材或者组织立体后液氮速冻，在-80摄氏度或者液氮中保存，应当小份分装从而使反复冻融得以避免。

实验步骤

收集-裂解变性-抽提-上层溶液-异丙醇沉淀-离心洗涤-干燥溶解-RNA溶液。