Southern杂交预杂交和杂交

分子杂交（molecular hybridization）是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸（叫做探针）间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下Southern杂交方法。

预杂交

一个预杂交的过程必须在将探针和固定在膜上的DNA片段杂交以前先进行。由于既然可以和DNA片段的膜结合，那么同样也可以和探针DNA结合。因此，在杂交以前，必须封闭所有结合DNA的位点。这即是预杂交的原因。

在 一个水浴摇床的封闭塑料袋中浸泡转印后的滤膜进行预杂交，有预杂交液在袋中，在膜上使预杂交液不断地流动。事实上，没有探针的杂交液就是预杂交液，预杂交液中的大分子能够将膜上所有非特异性吸附位点封闭。

杂交

双链DNA探针需要加热并行成单链以后再进行杂交，在预杂交液中对转印后的滤膜进行温育4-6个小时，就能够将表标记探针DNA加入，也就是杂交反应能够进行了。

杂交反应进行的缓冲盐溶液的离子强度相对而言均比较高。温度越高，离子强度越高，那么杂交就越加的严格。也就是说，要想杂交杂交反应在低盐高温下进行，那么探针和待测顺序之间的同源性必须非常的高。

洗膜

在洗膜过程中，需要不断振荡，不断使用放射性检测仪岁膜上的放射强度进行检测，如果放射强度指示数值高于环境背景1-2倍，那么洗膜立刻停止。

在2SSC中浸入洗完的膜两分钟，将膜取出，使用滤纸将膜表面的水分吸干，并且使用保鲜膜将其包裹，值得一提的是，不能够有气泡存在于保鲜膜和NC膜之间。