使用TRIZOL提取RNA步骤

核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在环境微生物检测、食品安全检测、输血安全、法医学鉴定、疾病控制ZX、临床疾病诊断、生物学研究以及畜牧业等多种领域得到广泛地应用。下面就让小编带你了解一下提取RNA步骤。

步骤

⒈样品的制备 

如果样品多糖、脂肪、蛋白质或细胞外物质，可能需要额外的分离步骤，匀浆后，在2-8摄氏度下以12000 ×g的离心力离心10min,将匀浆中不溶解的物质移除，高分子量DNA、多糖和细胞外膜包含于余下的沉淀中，而RNA包含于上层的超浮游物中。在来自于脂肪组织的样品中，在Z上层有大量的脂肪漂浮，所以应当将其去除。在干净的试管中移入清亮的匀浆溶液，然后将氯仿加入，并且继续之后的分离步骤。

2.分离

在15-30摄氏度下，孵育匀浆样品5min,从而完全分解蛋白体。每毫升TRIZOL将0.2 ml氯仿加入。将样品管盖盖紧，将试管用力摇晃15s并且在30摄氏度下将其孵育2-3min中。在2-8摄氏度下以不高于12000 ×g的离心力高速冷冻离心15min。离心后，混合物分为上层无色的水样层、中间层以及下层红色的苯酚-氯仿层三层。RNA在水样层中，所加TRIZOL容量的60%左右为水样层的容量。

3.沉淀 RNA

在干净的试管中移入水样层转移，若要进行DNA和蛋白的分离，需要保留有机层。通过混合异丙醇和水样层来使RNA沉淀。Z开始匀浆化时，1毫升TRIZOL对应0.5毫升异丙醇。在15-30摄氏度下孵育混合的样品10min，并且在2-8摄氏度下以不高于12000 ×g的离心力高速冷冻离心10min。离心前RNA沉淀一般不可见，离心后，在试管壁和管底附着形成的胶状片状沉淀。

4 .洗脱 RNA

将上层悬液移去，RNA沉淀使用75%的乙醇洗涤一次，1毫升TRIZOL至少加1毫升75%的乙醇。将混合样品旋涡振，并且在2-8摄氏度下以不高于7500 ×g的离心力高速冷冻离心5min。

⒌ 再溶解RNA

Z后，将RNA沉淀简单干燥，RNA的离心干燥要在真空管里进行。特别重要的是，不要完全干燥RNA沉淀，那样会导致它的可溶性极大地降低。将RNA样品部分溶解（A260/280比值< 1.6），分几次使用移液管移取无RNA酶的水或0.5% SDS溶液来进行RNA的溶解，并且在55-60下孵育10min，1**%甲酰胺（除去离子）可以溶解RNA，并且在–70摄氏度下保存。