液相色谱仪色谱柱的选择

　　在选择液相色谱仪色谱柱之前，先多了解自己的样品和杂质，他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等。样品是极性的且弱酸性的;就可以选择C18在1**%酸性水溶液条件下检测，即要选择承受1**%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱。

液相色谱仪色谱柱选择的思路

　　1、确定分离目的，确定液相色谱仪是否要求高分离度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的实验成本等。

　　2、评估分析物的化学性质，诸如化学结构、溶解性、稳定性等。

　　3、选择合适的色谱柱，了解色谱填料的物理和化学性质。

液相色谱仪色谱柱选择的条件

　　1、填料基质

　　①硅胶基质：纯度高本钱低，强度大，化学修饰轻易，但pH值范围有限。大多硅胶基质填料在pH2-8之间稳定，但经过特殊修饰的硅胶键合相可以稳定在pH1.5-10。

　　②聚合物基质：应用pH值范围宽，温度稳定(高温可以达到80度以上)，机械强度小。

　　2、颗粒外形

　　大多现代液相色谱仪填料都是球形颗粒，但有时是不规则的颗粒。球形颗粒提供较低的柱压、较高的柱效和稳定性以及较长的柱寿命在使用高粘度的活动相时;不规则颗粒有较大比表面积和相对低廉的价格。

　　3、颗粒粒径

　　粒径越小柱效越高、分离度越高，但同时会导致较高柱压降。选择1.5-3μm的填料以解决一些复杂样品，液相色谱仪可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒径的填料用作半制备或制备柱。

　　4、含碳量

　　含碳量指的是硅胶表面键合相的比例，与比表面积和键合覆盖度等有关。高含碳量进步柱容量、分辨率及分析时间，用于要求高分离度的复杂样品;低含碳量分析时间短、展现不同的选择性，用于快速分析简单样品及需要高含水活动相条件的样品。一般C18的含碳量在7-19%不等。

　　5、孔径和比表面积

　　液相色谱仪吸附介质是多孔的颗粒，尽大多数的反应表面于孔内。因此，分子必须进进孔内才能被吸附和分离。

　　孔径和比表面积是相辅相成的两个概念。孔径小比表面积大，反之亦然。比表面积大，增加样品与键合相之间的反应，增加保存，上样量和复杂成分的分离度;比表面积小，平衡时间快，适合梯度分析。

　　6、孔容和机械强度

　　孔容，又称“孔体积”。指单位颗粒的空隙体积大小。它能很好的反应填料的机械强度。孔体积大的填料相对孔体积小的填料机械强度要略弱。孔体积为1.5mL/g或更小的填料大多用于液相色谱仪分离，而孔体积大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色谱和低压色谱。

　　7、封端

　　封端能够降低极性碱性化合物由于与裸露的硅醇基相互作用而产生的拖尾峰。不封端键合相相对封端键合相会产生不同的选择性，尤其是极性样品。

液相色谱仪色谱柱填料的选择

　　液相色谱仪中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。

　　一、硅胶基质填料

　　1、正相色谱

　　正相色谱用的固定相通常为硅胶以及其它具有极性官能团，如胺基团和氰基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其它极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组份的极性大小，即极性较弱的组份Zxian被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正己烷、氯仿、二氯甲烷等。

　　2、反相色谱

　　反相色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。

　　样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份Zxian被冲洗出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有：C18、C8、C4、C6H5等。

　　二、聚合物填料

　　聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要优点是在pH值为1～14均可使用。相对于硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。

　　三、其它无机填料

　　其它无机填料液相色谱仪色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般于特殊的用途。

　　石墨化碳正逐渐成为反相色谱柱填料。这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性。该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强。石墨化碳可用于分离某些几何异构体，又由于在液相色谱仪流动相中不会被溶解,这类柱可在任何pH与温度下使用。

　　氧化铝也可用于液相色谱仪，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在pH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用。

　　新型氧化锆基质色谱填料也可用于液相色谱仪，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应用pH范围1～14，温度可达100℃。由于氧化锆填料是Z近几年才开始研究，加之面临的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。