应用分享︱采用TSKgel G2000SWXL色谱柱测定口服水解蛋白的分子量分布

口服水解蛋白（Oral Protein Hydrolysate）在临床上是一种用来治 疗低蛋白血症和由于各种病情造成营养不良的药物。在遇到骨折、烧伤或者伤口长时间愈合不上等症状时，也可以服用口服水解蛋白。它的主要成分为氨基酸、短肽、糖和铁、锌、钙等微量元素。

本次分享的应用是通过尺寸排阻色谱法对口服水解蛋白的分子量分布进行测定。作者采用了TSKgel G2000SWXL凝胶色谱柱进行了分析。

01 样品的制备

①混合对照品溶液的配制：精密称取各对照品适量置同一容量瓶，用流动相稀释制成混合对照品溶液。其中，重组人胰岛素、胸腺法新、生长抑素、甘氨酸含量为0.5 mg/mL，肌苷为0.2 mg/mL。

②供试品溶液的配制：精密称取本品100 mg置50 mL量瓶，用流动相稀释至刻度，摇匀。

02 分析条件

色谱柱：TSKgel G2000SWXL (7.8 mmI.D.×30 cm, 5 μm, 指定批次)

流动相：三氟醋酸-乙腈-水（0.05:35:65, v/v）

流速：0.7 mL/min

进样体积：5 μL

柱温：30℃

检测器参数：UV@220nm

03 分析结果

图1 混合对照品溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图 (2mg/mL)

04 结果与讨论

取混合对照品溶液按上述方法测定 (图1)。以各峰的保留时间为横坐标，分子量对数为纵坐标，进行线性回归。取供试品溶液同法测定 (图2)。

结果表明：在口服水解蛋白样品中，分子量大于胸腺法新的成分未检出，确证口服水解蛋白是以分子量为240 Da左右的短肽、游离氨基酸为主。采用TSKgel G2000SWXL色谱柱可满足口服水解蛋白分子量分布的测定。