- 2022-08-09 19:15:24 来源:Eppendorf 中国有限公司 浏览量:260次
- 【导读】使用 BCA 蛋白测定时,反应液的颜色会随着时间的延长而不断加深。显色反应的速度与温度有关,为了获得稳定的结果,需要保持恒定的温度及足够的时间,以确保精确定量。
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今天是七夕,我国传统的“情人节”,每当这个时候,各种花式浪漫总是轮番上演。而在分子实验室里,一场浪漫的七夕约会,也正在上演中……
七夕 CP:实验人员 X 混匀仪
约会地点:分子实验室
约会任务:作为实验中必不可少的步骤,混匀也隐藏着许多细节,今天,小 E 就来给大家介绍下你的实验室 最 佳 CP 混匀仪在各类实验中分别是怎么应用的!
(体积小巧的混匀仪,是实验室不可或缺的得力助手)
分子生物学实验室
应用一:核酸提取——裂解
核酸提取中重要一步就是去除蛋白杂质。蛋白酶 K 可以酶解与核酸结合的蛋白,使核酸暴露并游离在溶液中,便于后续的提取。酶需要在一定的温度条件下才能发挥作用,所以蛋白酶K需要 55-65 ℃ 下进行孵育,理想的孵育温度为 58 ℃,孵育时间根据样品情况而定,一般 15 分钟至 48 小时。加入蛋白酶K溶液的样品需充分混匀后才能充分裂解。
(离心机和混匀仪是核酸提取过程中不可缺少的)
分子生物学实验室
应用二:细菌转化方法——热激法
细菌转化是分子克隆的关键步骤。在细菌转化中,DNA(通常以质粒的形式)被导入到有能力的细菌——通常为大肠杆菌。随着细菌的培养,质粒都被扩增并复制了一个重组 DNA 分子。将质粒 DNA 导入大肠杆菌的方法有很多,但都需要加热和混匀。
一种非常常用的方法是热激法,它要求在两个温度下进行加热。首先,将感受态细菌和质粒的混合物置于 42 ℃ 环境中热激 60 秒,然后在冰盒上,加入培养液后,在 37 ℃,250 rpm 转速条件下培养,最 后在琼脂平板上选择阳性克隆菌进行回收,以备后续摇床大规模培养。
像这样迅速升温并冷却的方法,对温度控制的要求是比较高的,小 E 推荐组合使用,来精 准控制热激时间。*温馨提示:热激时间不易过长,否则会造成细菌死亡,导致转化效率下降。
(ThermoMixer® C 具有倒 计 时功能,能确保操作人员控制热激时间,确保最 优转化效率)
金 牌 辅 助
扩容神器:Eppendorf SmartExtender 延伸框,帮您轻松提升热激效率
SmartExtender 延伸框可同时对多达 12 个离心管 (1.5 mL) 进行 42 ℃ 热应激,同时可在 SmartBlock 1.5 mL 加热模块中进行 37 ℃ 细菌培养,从而使您的实验室获得较高的通量和灵活性。
分子生物学实验室
应用三:蛋白浓度检测经典方法之一 BCA 检测法
该方法基于著名的双缩脲反应,将碱性溶液中的二价铜离子还原成1价铜离子,BCA 反应液会与 1 价铜离子螯合形成稳定的紫蓝复合物,再根据检测到该复合物的浓度便可换算出检测体系中的总蛋白浓度。该方法有灵敏度高,受干扰物质影响小的特点。
待样品与 BCA 反应试剂充分混匀后,需 37 ℃ 孵育 30 分钟。在某些加强试剂盒方法中,需 60 ℃ 孵育 15 分钟。
(分光光度计和混匀仪助你轻松处理 BCA 检测)
在这个方法中,样品的混匀非常重要,否则就会造成显色不均匀,导致无法检测或结果有误。
Eppendorf 2D Mix-Control 二维混匀操控技术,可以对样品管和工作板中的液体样品进行可控的、快速高效的二维混匀, 可靠的防溅射技术能防止管盖润湿和交叉污染。
来看看混匀的效果对比图吧。
【以 1,800 rpm,1 分钟,混匀 50 μL 样品的效果。Eppendorf ThermoMixer® C 混匀仪,高效混匀(右图);同类产品混匀效果不理想(左图)】
使用 BCA 蛋白测定时,反应液的颜色会随着时间的延长而不断加深。显色反应的速度与温度有关,为了获得稳定的结果,需要保持恒定的温度及足够的时间,以确保精确定量。
在样品混匀、加热和冷却的过程中,管盖和管壁上的冷凝水也会对温度产生影响,这个时候就要介绍另一个混匀仪的好辅助:Eppendorf ThermoTop® 热盖。
Eppendorf ThermoMixer® 混匀仪 与 PCR 仪热盖技术结合,研发出 Eppendorf ThermoTop® 热盖。
卓 越的 Eppendorf condens.protect 技术可有效防止在管盖和管壁上产生冷凝水,从而保证孵育期间样品体系一致。此外,进一步提高了温度均一性,优化反应条件,从而确保更佳的实验结果。
推 荐 配 置
ThermoMixer® C 混匀仪+ SmartBlock™ 1.5 mL加热模块
以上仅仅是分子生物学实验室中利用混匀仪进行样品处理的一小部分内容,我们还做了另外一些应用的摘录,当然混匀仪的应用远远不止于此。
Eppendorf 在混匀和温控领域具备超过半个世纪的制造经验和持续发展力,新一代高品质、经久耐用且性能可靠的智能温控和混匀设备,自由搭配多种 SmartBlock™ 加热模块满足各种样品处理需求——只有你想不到的,没有它做不到的!
点击图片了解更多 ThermoMixer® C 混匀仪及多种可更换 SmartBlock™ 加热模块,满足实验室各类应用需求:
(ThermoMixer® C 混匀仪可适配多种 SmartBlock™ 加热模块)
- 标签:混匀仪 , 离心机 , 核酸提取 , 分光光度计 , BCA 检测
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七夕咕呱实验汪,命中CP就是它!
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