- 2022-09-20 14:42:28 来源:马尔文帕纳科 浏览量:1012次
- 【导读】本文用Zetasizer Ultra分析了3个AAV样品。浓度结果与基于衣壳ELISA的病毒滴度测定的结果进行对比。
-
Hot
AAV 应用热点
DLS+SEC+DSC多种技术结合
助力AAV基因递送载体的表征
部分Covid-19疫苗通过引入mRNA来触发对SARS-CoV-2冠状病毒刺突蛋白的免疫反应。递送mRNA的载体之一有腺相关病毒(AAVs)。有很多生物物理的技术可以为候选疫苗的研究和开发提供新的见解。比如光散射技术可用于测量病毒衣壳的浓度,比ELISA方法更迅速;色谱技术可用于测量空壳率;完整衣壳可在微量热技术中显示出不同的特征。
1.DLS 动态光散射技术
DLS可用于样品关键生物物理参数的测量,或用于筛分优质、稳定的的样品和那些受污染、有聚体的样品。通过Zetasizer Ultra纳米分析仪的多角度动态光散射技术(MADLS),不仅可以在几分钟内测量样品的流体动力学直径和粒径分布(包括聚集体),还可以测量每个群体的颗粒浓度。此外,仪器新的自适应相关算法提高了测量精度、重现性,以及对异物或大的聚集体的包容度。
图1. Zetasizer Ultra纳米粒度仪和DLS测量粒径分布的案例
使用MADLS技术
进行AAV载体大小和浓度测量
本文用Zetasizer Ultra分析了3个AAV样品。浓度结果与基于衣壳ELISA的病毒滴度测定的结果进行对比。
采用多角度动态光散射(MADLS)技术测量3个AAV样品的颗粒大小分布,重复测量3次,结果如下。显示有少量样品团聚。标准品(A)发生的团聚比AAV样品(B和C)更多一些。同时分别测得了AAV单体和团聚体的颗粒浓度,结果见图D-F。表1中对比了MADLS方法和衣壳ELISA法测得的浓度结果。AAV样品的RSD<15%,ATCC AAV2参考标准品的RSD 45%。
图2. 颗粒大小分布的3次重复测量结果:图A-ATCC AAV2标品,图B-AAV样品1,图C-AAV样品2。图D-F的颗粒浓度结果一一对应图A-C中的样品。
采用AAV衣壳ELISA方法进行测量
酶联免疫吸附试验 (ELISA) 是病毒滴度或衣壳浓度的标准测量方法。我们将MADLS浓度数据与已有的衣壳ELISA方法测量的数据进行比较。单分散rAAV样品(RSD 13-15%)与ELISA方法测量的rAAV衣壳滴度几乎没有差异。
这些结果表明了完整 rAAV 衣壳的无标记分析方法与其他常见滴度测定方法是互补的。发生团聚的多分散rAAV样品的RSD高达45%。我们认为这是因为多分散样品的尺寸精度较低。
表1. 衣壳ELISA测得的浓度数据和MADLS测定的颗粒浓度数据,3个样品分别是ATCC AAV2参考标准品,样品1,样品2。浓度数据单位是颗粒数量/ml。n表示3次重复测量中观察到该峰的次数。n/a表示未观察到该峰。
2.SEC尺寸排阻色谱技术
多检测器尺寸排阻色谱(SEC)可用于多种rAAV属性的测量,如衣壳滴度、绝 对分子量、聚集体、寡聚体、片段分布和空壳率。
市售rAAV5样品(Virovek,US)含有空衣壳和完整衣壳的混合物。完整衣壳rAAV样品Mw是4.49x106 g/mol,蛋白质含量86%,ssDNA Mw 6.13x105 g/mol,完整衣壳AAV占比78.1%,总滴度7.48x1013(单体和聚集体)。空rAAVs Mw小一些,3.84x106 g/mol,总滴度5.91x1013(单体和聚集体)。当空衣壳和完整衣壳以已知比例添加时,测得的空壳率与预测结果高度相关,R2高达0.99。
图3. OMNISEC系统和示例色谱谱。示例中样品为空rAAV单体、二聚体、高聚体和片段的混合物。针对单体峰进行空壳率分析。
图4. OMNISEC空壳率分析结果。预估值(表格第三列)来自添加的空衣壳和完整衣壳比率,调整到100%。基于Mw得到完整衣壳占比 78.1%。计算值(表格第四列)基于单体峰的Mw值得到。
3.DSC 差示扫描量热技术
差示扫描量热仪(DSC)可用于测量蛋白质、核酸和病毒衣壳的热变性和热稳定性。该技术测量溶液中分子热诱导的结构变化的焓变(ΔH)和结构转变温度(Tm)。该测量方式直接、溶液相和非标记,不需要额外的荧光标记或抗体捕获。
空衣壳和完整衣壳rAAV5样品(Virovek, US)的PEAQ-DSC结果显示有多个转变温度(Tm),与衣壳分解(Tm1)和ssDNA熔融(Tm2)有关。此外,完整rAAVs在50度时显示出弱的热特征,而空壳rAAVs没有,这表示热诱导事件的发生可能与衣壳脱壳相关的完整rAAVs里的结构重组有关。
图5. MicroCal PEAQ-DSC自动系统和完整rAAV的DSC热图谱示例。图谱显示了明显的热转变温度(Tm)分别是89°和94°。红星号标注出早期的热转变发生在50°。
总结
1, 衣壳ELISA方法和MADLS方法测得的颗粒浓度结果的RSD≤15%。有团聚颗粒时RSD为45%。
2, 多检测器SEC色谱仪可用于测量空衣壳和完整rAAVs的纯度、寡聚分布和空壳率。
3, 使用DSC表征衣壳分解和ssDNA熔融时空衣壳和完整rAAVs的不同热转变和热稳定性行为。
Zetasizer Ultra
Zetasizer Ultra 纳米粒度及电位分析仪
Zetasizer Ultra 是快速而准确地测量颗粒和分子大小、颗粒电荷以及颗粒浓度的终 极伴侣,其拥有用于高分辨率粒度测量切角度无关的多角度动态光散射(MADLS)技术可以更深入地展现样品的颗粒分布,电泳光散射(ELS)技术可用于测量颗粒和分子的Zeta电位,以显示样品的稳定性和/或团聚倾向性。可以用于rAAV 颗粒的粒径及衣壳滴度的表征。
OMNISEC
OMNISEC 尺寸排阻色谱仪
OMNISEC是个多检测器SEC系统,包括示差检测器(RI)、紫外检测器(UV)、光散射检测器(LS)和粘度检测器(IV)。可以用于表征和研究附着在脂质纳米颗粒颗粒递送载体上的药物量以及产品的分子量和结构。
MicroCal PEAQ DSC
MicroCal PEAQ DSC差示扫描量热仪
差示扫描量热法(DSC)是一种功能强大的分析技术,用于表征和分析蛋白质和其他生物分子的热稳定性。
微观世界大有可为
We're BIG on small!
Info
关于马尔文帕纳科
马尔文帕纳科的使命是通过对材料进行化学、物性和结构分析,打造出更胜一筹的客户导向型创新解决方案和服务,从而提高效率和产生可观的经济效益。通过利用包括人工智能和预测分析在内的最近技术发展,我们能够逐步实现这一目标。这将让各个行业和组织的科学家和工程师可解决一系列难题,如最 大 程 度地提高生产率、开发更高质量的产品,并缩短产品上市时间。
联系我们:
马尔文帕纳科
销售热线: +86 400 630 6902
售后热线: +86 400 820 6902
联系邮箱:info@malvern.com.cn
官方网址:www.malvernpanalytical.com.cn
- 标签:DLS 动态光散射技术 , MADLS技术 , ELISA方法进行测量 , 排阻色谱技术 , 差示扫描量热仪(DSC)
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
- 随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
为你精选
-
铜价迭创新高导致下游需求遭到抑制 仪器行业如何度过铜资源紧缺危机?
在生产过程中,通过精益生产、自动化升级等措施提高生产效率,降低单位产品成本。同时,优化产品设计,减少不必要的铜材料使用,提高产品的市场竞争力。
2024-04-29 16:08:11 业内交流
-
江苏跨境电商进出口额实现快速增长 哪些仪器有望受益跨境电商?
今年以来,江苏大力推动跨境电子商务高质量发展。 持续提升货运专线服务能力和覆盖范围,打造特色跨境电商产业带。 跨境电商进出口额实现快速增长。
2024-04-16 11:20:44 业内交流
-
华为助力金融行业加速拥抱AI 仪器行拥抱AI有哪些机遇和发展?
据华为数据存储微信ID显示,4月11日,以“数字创造未来,智慧金融”为主题的2024华为金融创新数据基础设施峰会在重庆举行。 在本次峰会上,华为数据存储产品线总裁周跃峰正式发布了金融行业四大解决方案。
2024-04-15 10:45:52 业内交流
-
国家发改委确立煤炭产能储备制度 有序建设储备煤矿项目哪些仪器将受益?
我们需要了解什么是煤炭产能储备制度。这是一种政府为了应对可能出现的能源供应短缺或其他突发情况,而提前储备一定数量的煤炭生产能力的制度。这需要在正常生产之外,再额外建设一些煤矿,以备不时之需。
2024-04-12 16:58:33 业内交流
-
央行加大对住房保障体系经融支持力度 地产重构经营模式带来哪些仪器行业机遇?
住房保障体系的完善和房地产市场的稳定发展,将促进相关产业链的拓展和完善。其中,检测和认证服务将成为重要的一环。从建材的质量检测到室内空气环境的评估,都需要专业的仪器设备来完成。
2024-04-07 13:30:11 业内交流
-
铜价迭创新高导致下游需求遭到抑制 仪器行业如何度过铜资源紧缺危机?
在生产过程中,通过精益生产、自动化升级等措施提高生产效率,降低单位产品成本。同时,优化产品设计,减少不必要的铜材料使用,提高产品的市场竞争力。
【AAV】DLS+SEC+DSC多种技术结合,助力AAV基因递送载体的表征
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi
- 51劳动节丨致敬劳动者!节日快乐!
- 光学方案 | Girl Gang Garage利用三维扫描解决方案ZEISS T-SCAN hawk 2进行定制汽车改造
- 三思纵横试验机助力第五届全国复合材料结构力学青年科学家论坛圆满成功
- 放假通知 | CATO祝您五一劳动节快乐!
- 5月活动预告 | 美好初夏,5月精彩看这里→
- 会议活动|安杰科技2024年气相分子吸收光谱仪技术培训班圆满落幕
- 客户文章:实时谱图搜索技术实现脂质精细结构解析
- 尊重生命-关爱实验动物
- 奥玛环素(Omadacycline):新型四环素类抗生素及其杂质研究进展
- 期待推新,重温陪伴——寻找您实验室里的德国耶拿TOC分析仪
- bruker rtespa - 150探针,购买找上海尔迪仪
- 保健品需求扩大,真空冷冻干燥机助力生产制作
- 超声波清洗机保养要点