- 2022-09-25 13:51:08 来源:大昌洋行(上海)有限公司(大昌华嘉科学仪器部) 浏览量:215次
- 【导读】自1999年问世以来,FlowCam®已经成为分析海洋和淡水样品的一种有价值的仪器。 在50多个国家有超过1000台FlowCam被用来来识别、计数和测量浮游植物、浮游动物和其他颗粒物。
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追踪有害藻(HAB)生长
准确地确定集群和丝状蓝藻的细胞计数,如微囊藻和鱼腥藻是监测潜在毒性蓝藻的关键。传统的方法,包括手工显微镜检查,耗时、繁琐、容易出错、难以验证。
在2017年3月的《有害藻类》杂志上,来自加州水资源部门的科学家描述了他们如何使用FlowCam®估计微囊藻的细胞丰度。这个技术简报解释了他们的方法,也适用于丝状蓝藻。
图1。集群藻类(微囊藻)和丝状藻类(Anabaena)可以使用FlowCam及其分析软件VisualSpreadsheet®枚举。每张图片下方标注菌落面积(ABD) (μm2)。
样品采集与制备
以下节选自Lehman et al.(2017),《2014年严重干旱对旧金山河口微囊藻爆发的影响》,《有害藻类63:94-1208》,描述了他们样品的收集和制备。
用Lugol溶液保存所要测定生物体积的微囊藻的两个样品(>75 μm粒径)。微囊菌落的生物体积是使用FlowCam数字成像流式细胞仪(Fluid imaging Technologies;Sieracki et al.,1998)检测获得Area (ABD)。为了更方便地测量集群藻的生物体积,将样品分成直径<300 μm的馏分,并在10倍和4倍放大下检测。>300μm样品在2倍放大下分析。基于FlowCam测量的细胞丰度结果与显微分析的结果密切相关(r=0.88,p<0.01)。
采用0.3m深度的全水(未处理)样品,测定了次地表水中浮游植物和蓝藻的生物体积和分类组成(>10 μm粒径分数)。这些样本保存在4℃,并在FlowCam数字成像流式细胞仪上保存1到3小时。FlowCam安装了一个荧光触发器,可以从碎屑中分离活的浮游植物(Sieracki et al.,1998)。将样品置于100 mL在10分钟内通过流通池中,采用10倍放大1,以此获得细胞的数字图像。
计算细胞密度:集群藻类
Lehman等人使用以下方法计算了含有集群微囊藻样品的细胞密度(细胞/mL)。
首先,测定微囊藻菌落中单个细胞的平均面积。从VisualSpreadsheet列表文件中选择集群(图2),用VisualSpreadsheet计算菌落的面积(Area, ABD)除以图像中人工计数的细胞数(图2)。
图2。微囊藻集群在VisualSpreadsheet软件中显示的图像。图下标注了每个集群的面积(ABD) (μm2)。下面的计算中使用了绿色突出显示的菌落图像。人工计数显示,每个高亮集群从左到右分别有4、6、13和28个微囊细胞。
在列表(LST)文件中分离出微囊藻后,将该文件导出至Excel,作为分类总结报告。在Excel单元格中输入以下公式,计算样本的平均细胞密度:
计算细胞密度:丝状藻类
计算集群藻细胞密度的方法也可用于计算丝状蓝藻(包括鱼腥藻的细胞密度。
为了确定单个细胞的面积(ABD),将鱼腥藻丝的面积(ABD)除以图像中细胞的数量。
利用VisualSpreadsheet文件中的图像(图3),确定Anabaena细胞的平均面积(ABD)为48 μm2。
在VisualSpreadsheet列表(LST)文件中筛分出鱼腥藻之后,数据被导出到Excel中,作为分类总结报告。将如下公式输入到Excel细胞中,计算丝状藻样本的细胞密度:
图3。VisualSpreadsheet显示出的鱼腥藻图像。每张图片下方标注了整个丝状藻类的面积(ABD) (μm2)。选取这些图像来计算单个细胞的平均面积(ABD)。
细胞丰度被用来追踪藻华生长。使用上述方法,FlowCam可以用来计算集群或丝状蓝藻藻华的细胞丰度。
流式颗粒成像分析系统
自1999年问世以来,FlowCam®已经成为分析海洋和淡水样品的一种有价值的仪器。 在50多个国家有超过1000台FlowCam被用来来识别、计数和测量浮游植物、浮游动物和其他颗粒物。
流式颗粒成像分析系统
FlowCam®8400(cyano)
性能优势
• 测量范围:3 μm ~ 1+ mm
• 识别、计数和测量浮游植物和浮游动物
• 高速样品处理:可在6分钟内处理1毫升样品
• VisualSpreadsheet®软件通过测量40+种形态学参数对颗粒图像进行分析,包括生物体积,颜色,形状和大小,并且分类类群
• FlowCam内集成淡水藻类图片库,可用于自动识别
• 数据库驱动软件可以满足在多个数据集之间进行时间排序和趋势分析的应用
- 标签:FlowCam , 流式颗粒成像分析系统
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用FlowCam进行集群和丝状蓝藻的细胞计数:方法和案例研究
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