关于自身脂肪，你了解多少？

谈到脂肪，不由得会想到“卡路里”、“减肥”、“控糖”等词条，大家也都想要甩掉身上的“拜拜肉”。

意大利的但丁说过：“世界上没有垃圾，只有放错位置的宝藏。”

你知道吗，脂肪组织是干细胞丰富且重要的来源，早在21世纪初，Zuk等医生就从人脂肪组织中提取分离出了脂肪源性间充质干细胞，因其具有免疫源性低、易获取、不涉及伦理问题等优势，获得了越来越多临床研究者的青睐，也是组织工程及再生医学的研究热点。

脂肪组织(LA)由发育成熟的脂肪细胞和血管基质片段(stromal vascular fraction，SVF)组成。SVF是一组异质性的细胞群，主要包括间充质干细胞、周细胞、内皮细胞、内皮祖细胞、单核/巨噬细胞和造血干细胞等。

SVF的获取方法主要包括酶消化法与机械乳化法。Lipogems®技术已经成为通过对自体脂肪组织微片段化获得具有高治 疗潜力的完整SVF和MSC的平台。这种微片段化脂肪组织（MLA）在骨关节炎（OA）的治 疗应用上富有成效。尽管MLA的临床应用已经扩大并在组织愈合方面产生了令人印象深刻的结果(特别是在骨科和重建手术)，但一个更精确的细胞表型相关的机制解释仍然需要。

通过过往流式细胞术对人吸 脂液（酶消化法）的研究分析证实， SVF由内皮祖细胞(EP) (CD31+CD34+CD146+)、内皮成熟细胞(EM) (CD31+CD34-CD146±)、周细胞(CD31-CD34 - CD146+)、动脉外膜外脂肪基质细胞(SA-ASC)(CD31-CD34 +CD146-)和移行周细胞(TP) (CD31-CD34 +CD146+)，以及有CD73、CD90和CD105的间充质标志物的表达。Vezzani等人最近的一篇论文分析了通过微碎片（MLA）获得的脂肪来源的血管周围间充质干细胞，与自体脂肪抽吸物（LA）来源的SVF相比，周细胞相比SA-ASC占明显优势。

为了更好的帮助理解脂肪组织来源的MSC治 疗干预日益增长的需求及机制解释，下面这边文章应用多色流式细胞术更全面的对用于骨关节炎软骨治 疗的微碎片脂吸物(SVF-MLA)基质血管组分进行表征分析，并将其与自体脂吸物(SVF-LA)进行比较，以明确定义MLA或LA来源的SVF中多能细胞的组成和比例。

研究人群

12例OA患者（男6 女6 ，年龄30-81岁），在圣凯瑟琳医院进行自体MLA膝关节注射。LA和MLA患者样本被送到克罗地亚萨格勒布儿童医院，室温避光保存过夜后处理。

流式检测方案

Duraclone SC干粉管，并加入LIVE/DEAD™ Fixable Yellow Stain，DRAQ7。

Duraclone SC干粉管

分析策略

排除粘连体细胞后，选取DRAQ7+的有核细胞，并通过CD45和死活染料，最终仅选取有活性的CD45-的有核细胞进行进一步分析。

经后续抗体表达分析确定SVF-LA 和 SVF-MLA中CD45-细胞有5群，分别为内皮祖细胞(EP) (CD31+CD34+CD73±CD90±CD105±CD146±)、内皮成熟细胞(EM) (CD31+CD34-CD73±CD90±CD105- CD146±)、周细胞(CD31-CD34-CD73±CD90+CD105- CD146+)、移行周细胞(TP) (CD31-CD34 + CD73±CD90+CD105- CD146+)，动脉外膜外脂肪基质细胞(SA-ASC)(CD31-CD34 + CD73highCD90+CD105- CD146 -)。由于所有样本经分析内皮成熟细胞(EM)和移行周细胞(TP)占有核细胞不足2%，所以不再继续分析。

结果

1. SVF-MLA的免疫表型相比SVF-LA以白细胞和SA-ASC的减少，但EP的增加为主，证明在脂肪组织微破碎过程中该细胞群显著富集。

2. SVF-MLA组周细胞/SA-ASC比值明显高于SVF-LA组。周细胞/SA-AS比值最高的样本来自男性患者，且显著的高于女性患者。EP/周细胞和EP/SA-ASC比值也是SVF-MLA组明显高于SVF-LA，但EP/周细胞比值与性别无关。

讨论

周细胞和SA-ASC被认为是MSC的体内祖细胞。在解释MSC在临床应用中的药 用效果时，它们得到了最多的关注。然而，此研究发现在微片段化（MLA）后， EP细胞的富集最为显著，其数量超过周细胞和SA-ASC。EP是伤口修复和组织再生的先决条件，在血管化过程中起重要作用。一些体外和体内研究已经证实MSC-EP相互作用具有增殖、促血管生成作用，以及分化作用。此研究进一步发现MLA中CD45+白细胞的比例显著降低，证实了之前通过微片段化技术降低促炎因子的报道。较低的炎症细胞因子来源可能有助于组织损伤部位的修复过程。

周细胞/SA-ASC和EP/SA-ASC的比值在男女之间是有差异的，推测体内的MSC，包括EP，可能受性激素的影响。但EP及周细胞之间与性别无关，这是微片段产物中最常见的两个群体。有报道称雌激素在人MSC中的产生以及循环EP的水平中可能作用于细胞因子和生长因子。体内研究的结果还有待探讨MSC产生的自分泌雌激素对其治 疗应用的影响。

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· 参考文献

1、 Denis Polancec , Lucija Zenic , Damir Hudetz , Igor Boric , Zeljko Jelec , et al. Immunophenotyping of a Stromal Vascular Fraction from Microfragmented Lipoaspirate Used in Osteoarthritis Cartilage Treatment and Its Lipoaspirate Counterpart. Genes 2019, 10, 474; doi:10.3390/genes10060474.

2 、张天钰,周双白,李青峰. 脂肪组织血管基质片段细胞分群的研究进展. 中国美容整形外科杂志2021年8月第32卷第8期。

3 、孙思捷. 脂肪血管基质组分获取方法及临床应用的研究进展. 《组织工程与重建外科杂志》2018年14卷6期353-356页。