- 2023-01-17 13:39:40 来源:力扬企业有限公司 浏览量:1208次
- 【导读】目前国内的聚酰胺薄膜差异不大,需要注意的是尽量选择近期生产批号的产品,同时因为聚酰胺薄膜都比较软,所以在放置于展开缸时需要注意底部不要弯曲。
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承接早前力扬举办的 [薄层色谱及对照提取物在配方颗粒质量标准应用] 网络会议,由于当天的反应热烈,未能一一回答所有问题,因此,我们再次邀请了当天的演讲嘉宾 - 郭隆钢老师与力扬企业的产品专家 - 唐吉鹤老师,对会议中的提问进行归纳及补充,以更全面的信息解答大家的疑问。
郭隆钢
国际 HPTLC 协会中国分会会员
广州科曼生物科技有限公司总经理
报告主题
薄层色谱及对照提取物在
配方颗粒质量标准应用
提问
Qustions
&
解答
Answers
01
问
用聚酰胺薄膜做鉴别时,斑点分离情况不好,可能是什么原因造成的?不同厂家聚酰胺薄膜之间区别大吗?
聚酰胺薄膜跟目前常用的硅胶板差异较大,从以往的实验经验来看,聚酰胺薄膜的方法主要是针对一些黄酮类成分的分离,然而的确分离度有限。
目前国内的聚酰胺薄膜差异不大,需要注意的是尽量选择近期生产批号的产品,同时因为聚酰胺薄膜都比较软,所以在放置于展开缸时需要注意底部不要弯曲。
02
问
滤纸预饱和过程如何进行?
通常展开这一步,放置薄层板时有三种方式:
展开剂放入后直接将薄层板放进去展开
展开剂放入后盖好盖子,预平衡 15 分钟左右或其他时间,然后再将薄层板放入
使用双槽展开缸,一侧放入展开剂,一侧在缸壁上贴上使用展开剂浸湿的滤纸,然后盖好盖子,预饱和 15 分钟或其他时间,再将薄层板放入展开。
所谓的滤纸预饱和过程就是第 3 种方式,其目的是让滤纸上的展开剂溶剂在预饱和过程中蒸发使得展开缸中的溶剂蒸汽达到饱和。此时展开缸的空间以及展开剂均是稳定状态,以保证薄层实验的稳定性。对于某些已经经验证确定好方法的条件中,可以使用此种方式。CAMAG 公司有自动展开设备,可以自动化的进行这一步。
CAMAG ADC 2
全自动薄层色谱展开系统
通常我们习惯使用第 2 种展开方式,因为在这个预平衡状态中以及放入薄层板后,薄层板的不同高度上的溶剂蒸汽吸附的比例及量与展开剂有所不同,造成在展开的整个过程是一个可以类似于溶剂梯度的展开过程,对于某些成分的分离情况更为适合。无论使用哪种方式,只要经过方法学验证后,我们选择分离度好,能够满足分析要求的方法即可,对于使用哪种方式并没有固定一定用某一种。
03
问
展开剂放一个槽还是两个槽比较好?
使用双槽展开缸的时候一般将显色剂放置于一侧,另一侧不用放。有时候需要在另一侧放氨水或者其他溶剂,或需要用到滤纸饱和的话会在方法中说明,没有特别说明则只需要在一侧放展开剂。
04
问
很多客户都在用 10cm × 20cm的薄层板,这样展开距离比较长。但按照老師的经验是不是 20cm × 10cm 的薄层板,即 10cm 的高度足够做目前绝大部分的产品?
之前也遇到过几个使用长板来分析的品种,比如龟板、生脉饮等。根据多年的经验,展距的增加并不一定提高斑点的分离度,通常普通板展开 8cm 即可,高效板 5 - 8cm 也可以有很好的分离度。具体品种应具体分析,在没有明确规定使用长板的情况下,为了更方便更具有普遍适用性,建议用 10cm 高的薄层板即可,需注意的是,任何更换都要一定的实验验证才可以放心使用。
05
问
请问中药材的 TLC 鉴别和高效液相指纹图谱鉴别选一个或者两个都做,还是结合两个的结果?
薄层色谱和液相色谱两者其实各有所长,比如生物碱、皂苷、糖类等成分,在液相紫外吸收很低,用薄层反而灵敏度很高。液相现在还可以用 ELSD 以及近几年的 CAD,两者均可以有效的提高以上成分的灵敏度。
某些药材里面同时有几类主要成分,可能在薄层上可以明显看到某几类,液相上另外几类更加清楚,在这种情况下两者可以互补。能使用同一个方法检测全成分必然更加完 美,但是通常很难办到。再如复 方中,人参、柴胡等皂苷类成分相比复 方中其他的成分于液相上的灵敏度低很多,就会造成液相指纹图谱不管分离度再好也没办法将此部分清晰的展现出来,加上薄层色谱指纹图方法能更好的展示其成分的全貌。综上,建议两个都需要做。
06
问
对复 方颗粒提取,点薄层色谱,然后过色谱柱,分离化学成分这些步骤有什么建议?
个人的经验,最 好是可以在一个方法里面将复 方中的有效成分进行分析,但中药复 方成分太多,薄层鉴别往往一个方法不够,可以分不同极性或不同类型的成分来分析。
在供试品制备的过程,提取溶剂以及前处理可以设置不同的方法来富集某类或者不同极性的成分。在得到比较好的分离前提下,可以进一步对不同斑点进行鉴定,目前 TLC-MS 的设备也有自动化的设备,但技术领域的应用还不够广泛,值得进一步研究。
07
问
在薄层点板显示的结果中,有不同颜色,如果做天然产物分离,是否可通过薄层点板的颜色了解某类中药里所含的成分类型?
可以的。薄层色谱的显色剂多种多样,且具有专属性,比如常用的氯化铝对于黄酮类成分比较适合,碘化铋钾对于生物碱类,茚三酮对于氨基酸类等等。很多品种国家药典委员会有薄层色谱图集,大家可以参考里面的显色剂思考和分析找到规律,国际薄层色谱协会也有部分显色剂的方法,大家可以参考。
08
问
看到郭老师是国际高效薄层色谱协会中国区的会员,请问这个协会是做什么的?以及如何入会?
国际高效薄层色谱协会总部位于瑞士巴塞尔,是专注于 HPTLC 技术科普的非营利性机构,协会宗旨是促进 HPTLC 在各分析领域的应用,协会在官网定期分享 HPTLC 专业知识,发布指南,贡献期刊,组织科学会议、教学和培训活动等。
此外,协会的重 点项目是建立并维护 “全 球草药 HPTLC 鉴别方法图谱集” (HPTLC Atlas),希望成为公认的质量控制参考工具。
协会目前设立有 9 个分会,分别是中国分会、北美分会、英国分会、澳大利亚分会、印度分会、德国分会、印度尼西亚、泰国分会等。中国分会主席是上海中医药大学王峥涛教授,分会秘书就是这次会议的主持人,也是本次线上讲座的发起人 - 力扬企业产品经理唐吉鹤 (邮箱candy.tang@nikyang.com) 。
如果各位老师对 HPTLC 技术感兴趣,可以在公众号对话框联系力扬或者直接发送邮件给以上邮箱,我们将发送协会会员申请表给您,申请表审核后即可免费阅读协会官网的所有资料和信息。
CAMAG HPTLC PRO 全自动色谱系统
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