GB 31658.20-2022 动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

表1-1 标准品基本信息

混合标准中间液（-18℃，3个月）：分别精密量取氯霉素标准储备液0.05 mL，甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺标准储备液各0.25 mL，于5 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成氯霉素浓度为1 μg/mL，甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺浓度为5 μg/mL混合标准中间液。

混合标准工作液1（现用现配）：取混合标准中间液0.1 mL，用20%甲醇溶液稀释成1 mL，氯霉素浓度为100 μg/L，甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺浓度为500 μg/L。

混合标准工作液2（现用现配）：取混合标准工作液1 0.1 mL，用20%甲醇溶液稀释成1 mL，氯霉素浓度为10 μg/L，甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺浓度为50 μg/L。

混合内标中间液（-18℃，3个月）：分别精密量取氯霉素-D5标准储备液0.05 mL，甲甲砜霉素-D3、氟苯尼考-D3、氟苯尼考胺-D3标准储备液各0.25 mL于5 mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，配制成氯霉素-D5浓度为1 μg/mL，甲砜霉素-D3、氟苯尼考-D3、氟苯尼考胺-D3浓度为5 μg/mL混合内标中间液。

混合内标工作液（现用现配）：取混合内标中间液0.05 mL，用20%甲醇溶液稀释成5 mL，氯霉素-D5浓度为10 ng/mL，甲砜霉素-D3、氟苯尼考-D3、氟苯尼考胺-D3浓度为50 ng/mL混合内标工作液。

用20%甲醇水溶液稀释，配制成氯霉素浓度分别为0.2 μg/L、0.5 μg/L、1 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L，甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺浓度分别为1 μg/L、2.5 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、25 μg/L、50 μg/L，氯霉素-D5浓度均为1 μg/L，甲砜霉素-D3、氟苯尼考-D3、氟苯尼考胺-D3浓度均为5 μg/L的系列标准溶液，临用现配，供液相色谱串联质谱仪测定。以定量离子峰面积比为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。

取试料2g（准确至±0.05g），置于50mL 离心管中，加混合内标工作液100μL,涡旋混匀，再加2%氨化乙酸乙酯（氨水:乙酸乙酯=1:50，v/v）溶液10mL（牛奶样品需另加无水硫酸钠3g），涡旋30s，涡旋振荡10min，8000r/min离心5 min。上清液转入另一50mL离心管中，残渣中加2%氨化乙酸乙酯溶液10mL，重复提取一次。合并两次提取液，于50℃氮气吹干，待净化。

取待净化残渣，加4%氯化钠水溶液（w/v）3mL，涡旋使溶解，再加4%氯化钠饱和的正己烷5mL，涡旋30s，8000r/min离心5min，弃去上层正己烷层，用4%氯化钠饱和的正己烷重复脱脂一次。加2%氨化乙酸乙酯溶液5mL，涡旋振荡5min，8000r/min离心5min，取上层有机相。用2%氨化乙酸乙酯溶液5mL重复萃取一次，合并有机相，50 ℃氮气吹干，加20%甲醇水溶液1mL，涡旋30s。过0.22μm尼龙滤膜（货号：SCAA-104），供液相色谱-串联质谱仪测定。

表3-1 梯度洗脱程序

表3-2 目标化合物质谱监测信息

表5-1  酰胺醇类药物标准曲线

表5-2  四种基质样品加标实验回收率(n=4)

参考《GB 31658.20-2022 动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》标准，部分内标选用优化后特征离子对替代原标准推荐离子对（甲砜霉素-D3：357.1/273.0，氟苯尼考-D3：359.1/188.1），采用优化后的方法进行检测。四种目标物的线性范围内标准曲线线性方程 R2>0.995，线性良好。四种基质的2个水平的加标回收率均在85%-110%之间，回收率良好，RSD<10%，可满足实验要求。