上新 | 5min甲基化超快速BS转化试剂盒，新增磁珠法！

随着分子检测的不断发展，甲基化qPCR检测以及甲基化NGS检测已成为非常普及的检测技术，这两种技术的必经之路就是甲基化转化，甲基化转化从方法学上可分为亚硫酸氢盐转化和酶法转化，近几年，基于DNA甲基化位点的检测试剂盒陆续获批面世。NMPA批准的甲基化检测试剂盒大部分为荧光PCR法，主要原因在于荧光PCR法操作简便，无需在PCR后电泳，且具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点。这些甲基化检测试剂采用的转化方法为亚硫酸氢盐转化法，亚硫酸氢盐转化成为DNA甲基化检测的“金标准”。但是传统的亚硫酸氢盐转化有很多局限性，例如过长的转化时间、严重的DNA损伤、被高估的5mC水平、C-U转化不完全等。

图1.亚硫酸氢盐催化C转化为U的化学反应概要

2024年1月2日，芝加哥大学何川教授团队在Nature Biotechnology上在线发表了题为Ultrafast bisulfite sequencing detection of 5?methylcytosine in DNA and RNA的研究论文，该研究提出并开发了对DNA和RNA上的5-甲基胞嘧啶修饰进行快速，准确检测的测序方法，简称为UBS-seq。该技术比现有的转化反应过程加速20-30倍，同时明显的降低了DNA损伤，以及C-U转化不彻底导致的背景干扰。

图2.UBS-seq法在微量样本中应用，传统BS转化相比有更低的背景噪音

图3.Superfast BS转化实验流程

投入不同量的293gDNA，293gDNA参入0.5% λ DNA，使用12227（磁珠法）与竞品1转化试剂盒进行头对头对比，同时采用双链甲基化DNA建库（12214ES），如图4所示：12227（磁珠法）对不同投入量的DNA中 λ DNA C的转化率≥99.5%，转化时间适当延长，能进一步提高转化效率。

图4.12227和竞品的转化率

10 ng cf DNA和50 ng FFPE DNA，cf DNA和FFPE DNA都参入0.5% λ DNA，使用12227（磁珠法）与竞品1转化试剂盒进行头对头对比，同时采用双链甲基化DNA建库（12214ES），如图5所示：12227（磁珠法）对不同样本中 λ DNA C的转化率≥99.5%，转化时间适当延长，能进一步提高转化效率。

投入不同量的293 DNA，使用12225和12227与竞品1转化试剂盒进行头对头对比，转化后采用Qubit ssDNA定量，计算回收率，如图6所示：12225的样本回收率能稳定达到60%以上，并且当样本量大于200 ng，回收率能超过70%，磁珠法转化试剂在高投入量下，回收率略低于柱式法，1 μg以内，磁珠法的回收率能达到60%。

备注：竞品1为磁珠法

在微流控的自动化单细胞DNA甲基化平台上，进行单细胞甲基化转化实验，样本中单细胞DNA转化率在99%左右。