寡核苷酸类药物的HPLC分析 (二) TSKgel SEC色谱柱应用例
上篇文章《寡核苷酸类药物的HPLC分析 (一) TSKgel IEC色谱柱应用例》中我们提到了随着寡核苷酸药物的研发步伐越来越快，对高纯度寡核苷酸产品的需求也日趋旺盛。目前，寡核苷酸主要是通过化学合成法制成，在合成过程中会产生工艺相关杂质和产品相关杂质，离子交换液相色谱法是分析这些杂质的重要手段之一。此篇文章我们将介绍尺寸排阻色谱法在寡核苷酸药物质量控制中的应用。
在寡核苷酸的分析中，尺寸排阻分离模式是基于碱基数量、磷酸基不同导致的分子量差别进行分离，通常用于简单的质量控制或纯度研究。该模式的优点是可以使用接近生理条件的洗脱溶液进行等度分离。有时也会添加水溶性有机溶剂来YZ疏水吸附。
分析不同碱基数目的寡核苷酸
下图是采用两根串联的SEC色谱柱TSKgel UP-SW2000来区分长度相差一个碱基的寡核苷酸混合物 (20-mer和N-1 19-mer)。
TSKgel UP-SW2000是东曹生命科学ZX开发的粒径2μm、孔径12.5nm的硅胶基质SEC色谱柱，主要用于分离分子量范围为1-150kDa的小蛋白、肽和寡核苷酸等生物分子。该色谱柱兼容HPLC和UHPLC系统，因此也能够从传统的HPLC-SEC方法转换到UHPLC。
下图是使用TSKgel G2000SWXL色谱柱分离不同碱基数量的合成寡核苷酸混合物的谱图。为了YZ核酸酶活性，有时会在流动相中添加EDTA等约1 mmol/L的螯合剂。
SEC法分离脂质体包被的siRNA
下图是使用TSKgel SuperSW2000色谱柱对天然型DNA核酸药物Defitelio进行质量分析的示例。
参考文献：Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb.23 (2011) 125, Edited by J.V. Bonilla et al.
寡核苷酸分析用SEC色谱柱
下表中列出了适用于核酸分离的SEC色谱柱。对于＜375 bp的短链核酸或寡核苷酸，UP-SW3000、UP-SW2000、G3000SWXL以及G2000SWXL这几款色谱柱都是比较推荐的。
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