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电泳实验常用办法

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【导读】1、醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离...

1、醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。

2、纸电泳
纸电泳(PE)是指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是最早使用的区带电泳,由于操作简单方便,因此在很多领域得以广泛应用。比如,分离、确定某些蛋白质,如糖蛋白、脂蛋白等,尤其是在分离氨基酸的混合物时,PE是一种很有价值的分析技术。在这种平卧式滤纸电泳装置(见图6-2)中,将滤纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的容器之间,样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后,再盖上绝缘密封罩,即可由电泳电源输入直流电压(100V~1000V)进行电泳。

3、凝胶电泳
由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式,被称为凝胶电泳。因此,该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。在临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的检测。

4、等电聚焦电泳
等电聚焦电泳是20世纪60年代中期问世的,一种利用有pH值梯度的介质,分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。因为这种电泳方法具有很高的分辨率,所以在等电点上只要有0.01pH单位的差异就能被满意地分离。因此,特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。

等电聚焦电泳法的特点:
①使用两性载体电解质,在电极之间形成稳定、连续、线性的pH梯度;
②由于“聚焦效应”,即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面;
③电泳速度快;
④分辨率高;
⑤加入样品的位置可任意选择;
⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点;
⑦适用于中、大分子量(如蛋白质、肽类、同工酶等)生物组分的分离分析。

5、等速电泳
等速电泳(CITP)是一种“移动界面”电泳技术。是电泳中惟一的分离组份与电解质一起向前移动,同时进行分离的电泳方法。同等电聚焦电泳一样,等速电泳在毛细管中的电渗流为零,它采用两种不同浓度的电解质组成,一种为前导电解质,充满整个毛细管柱;另一种为尾随电解质,置于一端的电泳槽中。图6-3是阴离子等速电泳示意图。CITP适用于小离子、小分子、肽类及蛋白质的分离。

6、双向凝胶电泳(二维电泳)
双向凝胶电泳(two-dimensionalgelelectrophoresis,2-DE)技术又称二维凝胶电泳技术,是目前常用的唯一一种能够连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的方法,第一向采用等电聚集电泳。第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳。广泛应用于生物学研究的各个领域,其原理是将高分辨率的等电聚集电泳和SDS-PAGE电泳联合组成双向电泳。

7、免疫电泳
免役电泳是电泳分析与沉淀反应的结合产物。该技术有两大优点:一是加快了沉淀反应的速度,二是将某些蛋白组分跟据其带电荷的不同而将其分开,再与抗体起反应,从而使本法更为微量化、多样化。因此,其应用范围日益扩大。
该方法可以用来研究:
①抗原和抗体的相对应性;
②测定样品的各成分以及它们的电泳迁移率;
③根据蛋白质的电泳迁移率,免疫特性及其它特性,可以确定该复合物中含有某种蛋白质;
④鉴定抗原或抗体的纯度。

上海汗诺仪器有限公司


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2004-11-04 09:23:10
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