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- 【导读】 1.样品预处理3mL尿液,加入4.5mL,0.1mol/L的磷酸钾缓冲液(pH6.0),调整pH值至6.3-6.3,加入β-葡萄糖苷酸酶,50℃水解2小时。2.Bond...
1.样品预处理
3mL尿液,加入4.5mL,0.1mol/L的磷酸钾缓冲液(pH6.0),调整pH值至6.3-6.3,加入β-葡萄糖苷酸酶,50℃水解2小时。
2.BondElutCertifySPE净化
a.活化:2mL甲醇,2mL水和2mL0.1mol/L的磷酸钾缓冲液(pH6.0)分别预淋洗SPE柱床;
b.上样:磷酸钾缓冲液液面与吸附剂平面水平时,立即上样;
c.淋洗:用2mL1mol/L乙酸淋洗,随后以200mL/sec的速度通空气吹扫柱床3min;
d.洗脱:
●酸性和中性药物用2mL氯仿/丙酮(3:1,v/v)洗脱,接收洗脱液1;
●然后用2mL甲醇淋洗SPE柱,并再一次通空气干燥3min;
●碱性药物用2mL含有2%的氨水的乙酸乙酯/二氯甲烷/2-丙醇(5:4:1,v/v)溶液进行洗脱,收集洗脱液2;
e.洗脱液1经氮吹干燥,残留物中加入100μL甲醇重新溶解,然后用4.5mL0.1mol/L的磷酸钾缓冲液(pH6.0)稀释;
3.BondElutCertifyIISPE净化
a.活化:2mL甲醇,2mL水和2mL0.1mol/L磷酸钾缓冲液(pH6.0)分别预淋洗SPE柱床;
b.上样:处理后的洗脱液1,直接载入活化好的SPE柱;
c.淋洗:用2mL0.1mol/L的磷酸盐缓冲液淋洗柱床;
d.以200mL/sec的速度通空气吹扫柱床3min;
e.洗脱,中性物质用2mL乙酸乙酯/丙酮(4:1)或氯仿/丙酮(3:1)洗脱,酸性物质用2mL甲醇洗脱,分别收集洗脱液3和4;
4.检测
●碱性药物洗脱液经氮吹干燥后,用100μL甲醇和重氮甲烷的香精油溶液进行衍生化处理,放置10min后,氮吹干燥,然后用100μl乙酸乙酯溶解,进行GC-MSEI分析。
●中性药物洗脱液2经氮吹干燥,用100μL甲醇/水(1:1,v:v)重新溶解,进行LC-MS/MS分析;
●酸性药物洗脱液3经氮吹干燥,用100μL的Methelute溶剂(苯基-3-甲基氢氧化铵)重新溶解,进行GC-MSPCI检测;
5.样品成分
非类固醇XY止痛药
卡布洛芬,clanobutin,扶他林,二氟尼酸,依尔替酸,依他尼酸,非诺洛芬,氟芬那酸,氟比洛芬,氟尼辛葡甲胺,呋塞米,吲哚美辛,吲哚洛芬,苯酮苯丙酸,痛立克,甲氯灭酸,甲灭酸,萘普生,舒林酸苯噻丙酸,托芬那辛,托麦汀,维达洛芬,佐美酸
皮质类固醇类药物
强的松,氢化可的松,氟米松,氟美松,加强龙,醋酸曲安奈德,脱氧皮质酮甲酯化或者重氮甲烷衍生化后通过GC-MS/MS检测的中性和酸性药物
乙醇和乙二醇类
麦酚生,美索巴莫,愈创蓝油烃,心得安乙二醇代谢物
苯二氮平类
安定,去甲羟基安定,硝基安定,羟基安定
类
,代谢物,苯巴比通,
其它药物
苯坐卡因,普罗林坦内酰胺代谢物,杀鼠灵,安体舒通
利尿剂
双氯非那胺,bendroflumethazide,环戊氯噻嗪,喹乙唑酮,氯噻酮,氯噻,甲氯噻嗪,美托拉腙
Pyrazolidindiones
苯基丁氮酮,ketasone,羟基保泰松,γ-羟基苯基丁氮酮
黄嘌呤类
,茶碱,可可碱,1,7-二甲基黄嘌呤,羟乙基茶碱,己酮可可碱
其它杂环类药物
丙基安替比林,美芬妥英,苯妥英,本方法中使用的SPE柱:
BondElutCertify(130mg,3mL,PN.12102051)和BondElutCertifyII(200mg,3mL,PN.12102080)。 我公司可提供产品:β-葡萄糖苷酸酶(德国默克公司,货号1.04114.0002) BondElutCertify(130mg,3mL,PN.12102051) BondElutCertifyII(200mg,3mL,PN.12102080)北京东方惠普科技有限公司详情可致电:010-820178366/68联系人:徐兢苑- 2004-07-20 10:02:38
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