采用实时荧光PCR技术，针对阪崎肠杆菌特异性基因设计引物和探针。PCR扩增过程中，与模板结合的探针被Taq酶分解产生荧光信号，荧光定量PCR仪根据检测到的荧光信号绘制出实时扩增曲线，从而实现阪崎肠杆菌在核酸水平上的定性检测。

1、样品处理

1）按照GB 4789.40-2016，取样品100g（mL），加入到含有900mL预热到44℃ BPW的无菌容器中均质，调节pH至6.8±0.2。

2）36±1℃培养18-24h。

注：也可参考其他地方标准进行样品的前处理。

2、核酸提取

1）取40μL增菌液于裂解液管中，98℃或沸水浴10min。

2）冷却至室温，吸取上清备用或者置于-20℃保存。

3、反应体系配置

从试剂盒中取出ES预混液，充分融化，短暂离心，然后将阴性对照、样品的DNA提取液、阳性对照各取5μL分别加入PCR管中，盖好管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。

4、PCR扩增

PCR管或PCR板置于PCR仪上，推荐反应程序设定如下：反应体系为25μL，在第二步每个循环60℃时检测荧光信号，检测通道选择FAM。

注：使用ABI系列PCR仪器，如果不添加ROX，“passive reference”和 “quencher”均选择“none”。