EZ-Tn5™ pMOD™-5 Transposon Construction Vector

• 定制EZ-Tn5™转座子的构建。

• EZ-Tn5转座子与PMOD-3 ORI / MCS>和PMOD-5 ORI / MCS>可用于各种抢救克隆的应用程序。*

EPICENTER提供了五种不同的EZ-Tn5™pMOD™转座子构建载体*，用于制备定制的EZ-Tn5转座子（表1）。每个载体均包含一个多克隆位点（MCS），其两侧是由EZ-Tn5转座酶特异且**识别的19 bp多活性末端（ME，用表示）。为了制备转座子，将任何感兴趣的DNA序列（例如选择标记，控制元件，报告基因）克隆到MCS中，然后通过PCR扩增或限制性内切酶消化产生转座子。任何转座子构建载体均可用于生成EZ-Tn5转座子，但它们具有不同的功能。

转座子构建载体PMOD-2 和PMOD-3 ORI / MCS>是基于pUC的载体。它们由ME序列组成，这些序列位于带有colE1复制起点的载体中MCS的侧面（图1）。EZ-Tn5的PMOD-3 ORI / MCS>还包含一个R6Kγ ORI  的ME序列内，这对于各种抢救克隆应用是有用的。这些载体在大多数情况下都能很好地构建转座子。但是，如果转座子是通过限制性内切酶消化制备的，则未切割的pMOD载体就有可能污染构建的转座子。

为了解决这个问题，colE1  ORI  被淘汰在PMOD-4 和PMOD-5 ORI / MCS>，它仅具有R6Kγ ori的  从这两个新载体中的R6Kγ起点复制取决于 TransforMAX™EC100D™ pir +  和  pir -116  大肠杆菌细胞产生的  pir基因产物  。由于大多数细菌菌株不包含 pir  基因，污染这些转座子制剂的未切割质粒DNA无法复制，从而消除了背景问题。

EZ-Tn5™ pMOD™-5 Transposon Construction Vector 好处说明

• MCS可以轻松克隆任何目标DNA。

• 使用EZ-Tn5转座酶在MCS侧翼的多活性19 bp马赛克末端序列进行高效转座。

• 转座子两端的独特引物结合位点，可使用正向和反向测序引物（另购）对插入位点进行双向测序。无需设计自己的底漆。

• 可以使用三个选项来准备用Pvu  II消化EZ-Tn5转座子  ，用Psh A I 消化  或使用载体随附的PCR引物进行PCR扩增。

Figure 2 (click to enlarge). EZ-Tn5™ Transposon Construction Vectors pMOD™-2 and pMOD™-3ori/MCS>replicate in standard E. colistrains using a colE1 origin of replication. Transposons made with the pMOD™-3ori/MCS> vector also have an R6Kγoriwithin the transposon, for rescue cloning applications.