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酪蛋白的性质鉴定

在孤独中排徊    2018-07-10    冷凝管    浏览 3032 次

酪蛋白的溶解度鉴定中,分别加入蒸馏水,稀盐酸,稀氢氧化钠,氯化钠溶液,产生的现象及原因

精彩问答
寒烟残雪入红尘 发布日期:2018-07-11
酪蛋白是牛奶中主要蛋白质,其浓度约为35g/L,是含磷蛋白质的复杂混合物。蛋白质是两性化合物,溶液的酸碱性直接影响蛋白质分子所带的电荷。当调节牛奶的pH值达到酪蛋白的等电点(pl)4.8左右时,蛋白质所带正、负电荷相等,呈电中性,此时酪蛋白的溶解度Z小,将会以沉淀的形式从牛奶中析出。而乳糖仍存在于牛奶中,通过离心的方法能将酪蛋白和乳糖分离出。根据酪蛋白不溶于乙醇和的特性,可用乙醇洗涤以除去粗制品中的脂质,使酪蛋白初步得到纯化。牛奶中含有40%-60%的乳糖,乳糖是一种二糖,它由一分子半乳糖及一分子葡萄糖通过?-1,4苷键连接。在乳糖分子中,仍保留着葡萄糖部分的半缩醛羟基,所以乳糖是还原性二糖,它的水溶液有变旋光现象,达到平衡时的比旋光度是+53.5。含有一分子结晶水的乳糖的熔点210℃。主要药品与仪器: 冰醋酸,乙醇n=0.95,,牛奶,浓盐酸,pH试纸Ph=3-5,PH=7-9,硅胶G,0。02mol/L醋酸钠溶液,乙酸乙酯,异丙酸,吡啶,苯胺,二苯胺,牛乳糖(纯),葡萄糖(纯),活性炭粉,浓硝酸,米伦试剂,硫酸,100g/L氢氧化钠溶液,50g/L氢氧化钠溶液,10g/L硫酸铜溶液,滤纸,尼龙布(200目)。低速冷冻离心机(大容量),自动指示旋光测定仪,层析缸,抽气吸滤瓶500mL,布氏漏斗,表面皿,烧杯600mL,400mL,100mL,圆底烧瓶,冷凝管,试管10X10mm,薄层层析装置,三角烧瓶500mL,100mL,容量瓶25mL,恒温水浴。操纵步骤: 1 从牛奶中分离酪蛋白取50mL去脂牛奶置于150mL烧杯内[1]。在水浴锅中小心加热至40℃,保持温度,边搅拌边慢慢滴加4mL冰醋酸,此时即有白色的酪蛋白沉淀析出,继续滴加稀醋酸溶液,直至酪蛋白不再析出为止,混合液的PH值为4.8[2]。继续搅拌并使悬浊液冷却到室温。放置10min后,将混合物放入离心杯中,于3000r/min离心15min。经滤布过滤上清液于100mL烧杯中,保留做乳糖的分离试验。沉淀(即酪蛋白)转移至另一个烧杯中,加15mL体积分数为=0.95的乙醇,搅匀后于布氏漏斗中抽气过滤,过滤后用滤布代替滤纸。用体积比为1:1的乙醇-混合液小心洗涤沉淀2次(每次10mL),Z后再用5mL溶液洗涤1次[3],然后吸滤至干。将干粉铺于表面皿上在室温下挥发去,烘干,称量并计算牛奶中酪蛋白的含量。取少量酪蛋白溶解于水中,用缩二脲反应,蛋白黄色反应,米伦反应分别定性地观察产生的蛋白质呈现色。 2 乳糖的分离和鉴定将实验1中离心分去酪蛋白后的上清液(即乳清)置于小蒸发皿中,用蒸气浴小心浓缩至5mL左右,稍冷却后,迅速加入10mL 95%乙醇,并用玻璃棒搅拌摩擦,使乳糖析出完全。经布氏漏斗抽气过滤用95%乙醇将乳糖晶体洗涤2次(每次用95%的乙醇将乳糖晶体洗涤2次每次5mL),即得粗乳糖晶体。将得到的粗乳糖晶体溶于尽可能少的热水中(50-60℃,约8-10mL)。然后再在次热溶液中缓慢滴加乙醇,边加边摇,直至产生混浊为止,再小心水浴中加热使混浊消失,将混合液放置过夜,让其自然冷却,吸滤收集析出的晶体用95%乙醇将乳糖晶体洗涤两次(每次用95%乙醇将乳糖晶体洗涤2次每次5mL)。抽干,产品即含有一分子结晶水的纯乳糖(C12H22O11? H2O)。将精制后的乳糖干燥并测定其比旋度。 1.牛奶在实验前不能放置很久,时间过长则其中的乳糖会慢慢变为乳酸影响乳糖分离。 2.加入的醋酸不可过量,过量酸会促使牛奶中的乳糖水解为半乳糖和葡萄糖。 3.洗涤时注意不要靠近火。 4.进行乳糖的变旋光现象操作时应先将测定的仪器和药品准备好,溶液的配置应尽量在2min完成。 5.氨水能迅速催化乳糖的变旋光现象,使之达到平衡。
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