在含卡那的培养板和培养基中都长，菌液PCR也有，就是提不出来质粒

我会很疼你宝贝 2010-08-06 培养板浏览 594 次

用pET
30a构建原核表达载体，连接产物转化，长了满板，条单克隆到含卡那的液体培养基中，长了，菌液PCR有条带，但提质粒提不出来

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精彩问答

哎呀果儿啊发布日期：2010-08-07

pET 30a 在菌内是偏保守的质粒，拷贝数比较低，建议你做大提质粒，否则带很暗，看不清。

还有，既然你已经菌液PCR有条带了，为什么不诱导表达做western来验证下有没有表达产物？

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他生再笑发布日期：2010-08-16

菌液pcr明显假阳性么，这种情况遇到的太多了。当然不能直接诱导表达，建议你在质粒上设计forward primer，连接片段上设计reverse primer，这样就可以排除假阳性了。重做一次克隆也快，你小心点，重头来遍就可以了，不用急，载体回收好，排除质粒污染，少酶切点，载体一点点就够了，时间长点，NEB的3h，一般的酶酶切过夜。

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