我用的是CTAB法提取植物基因组DNA,方法如下:1.称取材料0.2g,加入适量PVP,500µl冰冷CTAB,20µl冰冷RNA酶研磨;2.研磨后加入500µl加热的CTAB,装入1.5ml离心管中... 我用的是CTAB法提取植物基因组DNA,方法如下:
1.称取材料0.2g,加入适量PVP,500µl冰冷CTAB,20µl冰冷RNA酶研磨;
2.研磨后加入500µl加热的CTAB,装入1.5ml离心管中;
3.充分混匀后,65℃水浴1h,期间不时轻缓震荡;
4.12000rpm离心10min,取750µl上清液至另一离心管中;
5.加入等体积的Tris饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),摇匀后12000rpm、离心10min;
6.取上层清液650μl,加入等体积氯仿·异戊醇(24:1),摇匀后12000rpm离心10min;
7.取550µl上清液至另一离心管中,加入等体积异丙醇;
10.-20℃放置1h或室温下过夜;
11.12000rpm离心10min,倒弃上清液;70%冰冷乙醇洗涤沉淀2次;
12.倒弃上清液,风干沉淀;
14.加100µlTE溶解DNA,-20℃保存备用。
可是不知道为什么Z后异丙醇沉淀出来的DNA居然是深绿色的,已经接近黑色了。有的时候同样的步骤做出来的又是白色或者黄色的,这到底是怎么回事啊!希望知道的人给我个提示!
会不会是因为和氯仿-异戊醇反应的时间过长?因为我发现我剩下的那些材料过一段时间后都变得很绿。
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植物基因在组DNA提取为什么在65度水浴保温 不同生物(植物、动物、微生物)的基因组DNA的提取方法有所不同
CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六
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同物(植物、物、微物)基组DNA提取所同; 同种类或同种类同组织其细胞结构及所含同离差 异提取某种特殊组织D
提取后的话不能加多,加多了等于带入蛋白质污染。我们100微升中加0.5微左右10mg/ml浓度的RNase