质粒提取的步骤

朱_逸_仙 2012-12-06 质粒提取浏览 600 次

精彩问答

一明妈妈发布日期：2017-09-16

实验一
ApaLI (178)
P(BLA) ALPHA
质粒DNA的提取、质粒DNA的提取、酶切 DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳
ApaLI (2367)
EcoRI (397) AvaI (413)XmaI (413) SmaI (415)
APr
pUC19
BamHI (418) PstI (440)HindIII (448)
P(LAC) ORI
2686 bp
ApaLI (1121)
一实验目的
掌握碱裂解法分离质粒DNA的基本原理和操作要点。的基本原理和操作要点。掌握碱裂解法分离质粒的基本原理和操作要点了解限制性内切酶作用的原理、特点和酶切质粒了解限制性内切酶作用的原理、特点和酶切质粒DNA的试验方法的试验方法学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术的方法和技术学习琼脂糖凝胶电泳检测
二实验原理
质粒是一种染色体外能够稳定遗传的因子，质粒是一种染色体外能够稳定遗传的因子，具有双链共价闭环结构的DNA分子。是染色体外小型（ 200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分 DNA分子。是染色体外小型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分分子 DNAcccDNA），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子子（cccDNA），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。
培养细菌使质粒扩增三个基本步骤收集和裂解细菌分离和纯化质粒DNA 分离和纯化质粒DNA

5 0 回复 0条评论

全部评论

李子易y 发布日期：2012-12-07

1.挑取琼脂培养皿上的单个菌落，移至3-10mlLB培养液中，37℃150rpm培养过夜。
2.取1.5ml培养液移至Eppendorf管内，12000rpm离心1分钟，弃上清液。
3.将细菌沉淀悬浮于100μl溶液（GTE溶液）中，强烈振荡使之充分混匀。
4.加入200μl新鲜配置的溶液（NaOH/SDS溶液），盖严管盖轻轻颠倒离心管数次以混合内容物，置冰上5-10分钟。
5.加入150μl溶液（5mol/L乙酸钠，pH5.2），轻轻颠倒数次，使溶液充分混匀，冰上放置3-5分钟。
6.10000rpm，4℃下离心10分钟，将上清液转移至另一离心管中。
7.加等体积的酚:氯仿，振荡混匀，10000rpm，4℃离心2min，将上清转移至另一离心管中。
8.加两倍体积无水乙醇沉淀双链DNA，充分混匀，室内放置2分钟
9.10000rpm，4℃下离心10分钟。
10.弃上清液，加1ml70％乙醇洗涤沉淀双链DNA，10000rmp，4℃下离心5分钟，倒尽乙醇，吸干管口残留乙醇。
11.加40μg/ml RNase的TE的缓冲液溶解DNA。

8 0 回复 0条评论

您可能感兴趣的主题

北京三博远志质粒提取试剂盒 2010-12-02

北京三博远志质粒提取试剂盒特点... 北京三博远志质粒提取试剂盒特点展开三博远志质粒提取试剂
质粒提取 2012-12-04

s质粒提取的过程中一步离心十分钟，可还是有悬浮的乳白色沉淀，怎么解决... s质粒提取的过程中一步离心
质粒提取液 2017-10-09

提取质粒的3个溶液，具体配方... 提取质粒的3个溶液，具体配方展开 1. 溶液Ⅰ: 50mM葡
如何去除质粒提取中的RNA杂质 2011-12-10

质粒DNA琼脂糖电泳结果中，如在目标条带下方有大量模糊非条带状显色带，请问是什么... 质粒DNA琼脂
质粒提取后电泳图 2014-10-06

这是我用碱裂解法提取的质粒，电泳之后我惊呆了，很困惑，求助于各位，谢谢Z左边有marker，2000的..
质粒提取实验中，RNA酶一般处理多久啊？？ 2010-12-27

我想请教一下我现在要提取高浓度高纯度的质粒，用的是酚氯仿抽提的方法，为了出去蛋白质和RNA的影响我加完溶液
质粒提取的11个为什么 2016-03-31

1．溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁(cell wall)的主要化学成分肽聚糖中的
质粒提取中每一步的作用 2017-09-18

每一步的具体作用，如加溶液1，2，3的作用···... 每一步的具体作用，如加溶液1，2，3的作用··
Axygen mini-prepare 质粒提取试剂盒中的Buffer S12018-04-06

这是人家公司保密的东西，要内部人才会知道。不过根据其原理，应该可以推测出各溶液大致的组分吧（当然具体的浓度有
论述如何确保质粒提取的质量和数量。 2016-07-02

　　1试剂盒选择：看试验用途了，试剂盒方便省事，提出质量不错，可选择去内毒素等，但耗银子；自己手工提繁琐但省

最新主题 基因位于质粒上那么基因会通过复制传递给子代吗 已转到重组质粒上的单个人胰岛素编码基因能否 大肠杆菌中的质粒属于细胞质基因吗？ 用什么试剂盒大提质粒做转染实验好 重组疫苗的优点有什么？缺点呢？ 请问我们如何确定质粒的存在？ 碱裂解法提取质粒中为什么要冰浴 基因工程与人类遗传病: 相关版块

病毒核酸提取细菌核酸提取血液核酸提取土壤核酸提取反转录试剂盒植物核酸提取 PCR纯化胶回收试剂盒其它核酸提取纯化类试剂盒