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pET-28(a)+质粒的提取效果不好?提取量低怎么办?

金嫣堡    2013-10-09    质粒提取    浏览 397 次

精彩问答
潜新儿 发布日期:2013-10-10
Z佳答案 回答者:匿名用户 时间:2009-08-28 去哪里找Z出色的生命科学学术交流论坛?>>> pET-28(a)+质粒的拷贝数在细菌里本身就是很低,所以和其他质粒相比量会少一些,你可以多摇一段时间,16-18h都没有问题。 略微提高抗生素的浓度,有助于提高拷贝数。还有就是不要用BL21等表达菌提质粒,表达菌多没有endA-突变,质粒的完整性和保真性都不如DH5alpha,T*P10等菌,提取的质量也不高,因为碱裂解时会有大量的多糖干扰,质和量都不如DH5α和T*P10。 铺较高抗生素浓度的板子,重新划线,挑个大点的菌落再摇。培养时候也加大抗生素浓度。
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