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碱裂解法提取质粒DNA的电泳图谱,为何我的只有两条带?分别都是什么?

梦想老鸟    2013-03-18    质粒提取    浏览 742 次

1.我的Marker选的100bp是不是不合适?2.这两条带是线性和开环构型DNA??这两条带哪个是线性哪个开环构型DNA?超螺旋的为什么没有?...
1.我的Marker 选的100bp 是不是不合适?
2.这两条带是线性和开环构型DNA??这两条带哪个是线性哪个开环构型DNA?超螺旋的为什么没有?

精彩问答
kongxinzhu空 发布日期:2013-03-19
1)选择分子量 跟你的质粒接近的marker,Z理想的是包含质粒分子量在内,但据我所知没有这样的marker。
2)你这个电泳图上样量太大了,一方面条带不整齐难以判断,另一方面你干嘛要纠结于几条带呢?一般说是3条带也是理论上的,但实际上,在菌体内复制的质粒就是一个连续的状态,什么样都有,电泳结果就可能造成条带的局部涂布。
所谓的三条带解释没有定论,现在一般认为是超螺旋、复制型(处于复制的半开环状态,即眼结构)和开环DNA(一条链断了),早先认为的 线状DNA后来被否,因为质粒很不容易断裂成线状的。顺序应该是超螺旋在Z前边,开环在后边。
凭经验,我估计你的超螺旋和复制型合并成你那个粗的涂抹带了,后边那个细的是少量的开环DNA。
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