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如何测定未知蛋白的性质?

寻Q911349435昧    2007-05-04    微波合成仪    浏览 399 次

我现在已经通过SDS-PAGE发现了一些有意思的蛋白条带,想进一步研究这些蛋白的准确分子量及性质,还需要做哪些试验?双向电泳--分离蛋白质--然后呢?告诉我一个流程就可以了... 我现在已经通过SDS-PAGE发现了一些有意思的蛋白条带,想进一步研究这些蛋白的准确分子量及性质,还需要做哪些试验?双向电泳--分离蛋白质--然后呢?告诉我一个流程就可以了

精彩问答
包公123 发布日期:2007-05-05
测水铂电极 温度计 微波在线测水设备 测水密度计....
太多了 关键是你测水的什么啊
1 一般查水质看色度
所谓色度是指含在水中的溶解性的物质或胶状物质所呈现的类黄色乃至黄褐色的程度。溶液状态的物质所产生的颜色称为“真色”;由悬浮物质产生的颜色称为“假色”。测定前必须将水样中的悬浮物除去。
通常测定清洁的天然水是用铂钴比色法。此法操作简便,色度稳定,标准色列如保存适宜,可长期使用。但其中氯铂酸钾太贵,大量使用很不经济。铬钴比色法,试剂便宜易得。方法精密度和准确度与铂钴比色法相同,只是标准色列保存时间较短
2 如果是泡茶

据陆以恬《冷庐杂识》所记,乾隆每次出巡都要带一个精工制作的银质小方斗,命侍从“精量各地泉水”。结果是:京师玉泉之水,斗重一两;济南珍珠泉,一两二厘;惠山、虎跑,各比玉泉重四厘……因此,乾隆还亲自撰文,把颐和园西玉泉山水定为“天下diyi泉”。从此,出巡时必以玉泉水随行,但由于“经时稍久,舟车颠簸,色味或不免有变”,所以还发明了“以水洗水”的方法:把玉泉水纳入大容器中,做上记号,再倾入其他泉水加以搅动,待静止后,“他水质重则下沉,玉泉体轻故上浮,提而盛之,不差锱铢”。(据《清稗类钞》)乾隆测水、洗水的办法是否科学、可靠,姑且置而不论,但古人对“轻水”之重视程度,于此可见。

3 纯水为无色透明。清洁水在水层浅时应为无色,深层为浅蓝绿色。天然水中存在腐殖质、泥土、浮游生物、铁和锰等金属离子,均可使水体着色。

纺织、印染、造纸、食品、有机合成工业的废水中,常含有大量的染料、生物色素和有色悬浮微粒等,因此常常是使环境水体着色的主要污染源。有色废水常给人以不愉快感,
排入环境后又使天然水着色,减弱水体的透光性,影响水生生物的生长。
水的颜色定义为“改变透射可见光光谱组成的光学性质”,可区分为“表观颜色”和“真
实颜色”。
“真实颜色”是指去除浊度后水的颜色。测定真色时,如水样浑浊,应放置澄清后,
取上清液或用孔径为0.45μm滤膜过滤,也可经离心后再测定。没有去除悬浮物的水所具
有的颜色,包括了溶解性物质及不溶解的悬浮物所产生的颜色,称为“表观颜色”,测定未
经过滤或离心的原始水样的颜色即为“表观颜色”。对于清洁的或浊度很低的水,这两种颜
色相近。对着色很深的工业废水,其颜色主要由于胶体和悬浮物所造成,故可根据需要测
定“真实颜色”或“表观颜色”。
水的色度单位是度,即在每升溶液中含有2mg六水合氯化钴(Ⅱ)(相当于O.5mg钴)
和1mg铂(以六氯铂(Ⅳ)酸的形式)时产生的颜色为1度。
1.方法选择
测定较清洁的、带有黄调的天然水和饮用水的色度,用铂钴标准比色法,以度数
表示结果。此法操作简单,标准色列的色度稳定,易保存。
对受工业废水污染的地表水和工业废水,可用文字描述颜色的种类和深浅程度,并以
稀释倍数法测定色的强度。
2.样品的采集与保存
要注意水样的代表性。所取水样应为无树叶、枯枝等漂浮杂物。将水样盛于清洁、无
色的玻璃瓶内,尽快测定。否则应在约4℃冷藏保存,48h内测定。
(一)铂钴标准比色法(A)
1。方法原理
用氯铂酸钾与氯化钴配成标准系列,与水样进行目视比色。
2.干扰及消除
如水样浑浊,则放置澄清,亦可用离心法或用孔径为0.45μm滤膜过滤以去除悬浮物。
但不能用滤纸过滤,因滤纸可吸附部分溶解于水的颜色。
3.仪器
50ml具塞比色管,其刻线高度应一致。
4.试剂
铂钴标准溶液:称取1.246g氯铂酸钾(K2PtCl6)(相当于500mg铂)及1.000g氯化钴

(CoCl2·6H20)(相当于250mg钴),溶于100ml水中,加100ml盐酸,用水定容至1000ml。
此溶液色度为500度,保存在密塞玻璃瓶中,放于暗处。
5.步骤
(1)标准色列的配制
向50ml比色管中加入0、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3..00、3.50、4.00、4.50、5.00、
6.00及7.00ml铂钴标准溶液,用水稀释至标线,混匀。各管的色度依次为0、5、10、15、
、20、25、30、35、40、45、50、60和70度。密塞保存。
(2)水样的测定
①分取50.0ml澄清透明水样于比色管中,如水样色度较大,可酌情少取水样,用水稀
释至50.0ml。
②将水样与标准色列进行目视比较。观测时,可将比色管置于白瓷板或白纸上,使光
线从管底部向上透过液柱,目光自管口垂直向下观察。记下与水样色度相同的铂钴标准色
列的色度。

6.计算
色度(度)=A×50/B

式中:A——稀释后水样相当于铂钴标准色列的色度;
B----水样的体积(m1)。
7.注意事项
(1)可用重铬酸钾代替氯铂酸钾配制标准色列。方法是:称取0.04.37g重铬酸钾和
1.000g硫酸钴(CoS04·7H20),溶于少量水中,加入0.50ml硫酸,用水稀释至500ml。
此溶液的色度为500度。不宜久存。
(2)如果样品中有泥土或其它分散很细的悬浮物,虽经预处理而得不到透明水样时,
则只测“表观颜色”。
(二)稀释倍数法(A)
1.方法原理
为说明工业废水的颜色种类,如:深蓝色、棕黄色、暗黑色等,可用文字描述。
为定量说明工业废水色度的大小,采用稀释倍数法表示色度。即,将工业废水按一定
的稀释倍数,用水稀释到接近无色时,记录稀释倍数,以此表示该水样的色度,单位为倍。
2.干扰及消除
如测定水样的“真实颜色”,应放置澄清取上清液,或用离心法去除悬浮物后测定;如

测定水样的“表观颜色”,待水样中的大颗粒悬浮物沉降后,取上清液测定。
3.仪器
50ml具塞比色管,其标线高度要一致。
4.步骤
(1)取100~150ml澄清水样置于烧杯中,以白色瓷板为背景,观测并描述其颜色种
类。
(2)分取澄清的水样,用水稀释成不同倍数。分取50ml分别置于50ml比色管中,
管底部衬一白瓷板,由上向下观察稀释后水样的颜色,并与蒸馏水相比较,直至刚好看不
出颜色,记录此时的稀释倍数。

(A)本方法与GB 11903—89等效。
全部评论
icesnow13856 发布日期:2007-05-09
问题可复杂也可以简单,提取蛋白---提纯蛋白---茚三酮检测---紫外光谱仪测出280nm处的吸光度,求出提取率---laemmli方法求其分子量检测相关氨基---对应作相关试验(如,毒性测试)---应用
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