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tunel 试剂盒细胞与组织切片的有区别吗

卓汉东    2017-01-05    细胞凋亡试剂盒    浏览 438 次

精彩问答
莺燕599 发布日期:2017-01-06
TUNEL法可以通过原位标记DNA断裂端从而标记凋亡细胞,因此特别适用于组织凋亡研究,是目前研究组织体内细胞凋亡Z广泛采 用的手段。同时由于其原理是基于检测早期基因组的断裂,因此可以检测到很早期的细胞凋亡,且能通过标记的多少,进行半定量研究。
TUNEL的缺点是:1),操作要求高,组织样本需要固定(即使是培养细胞,也需要固定),不恰当的固定方法对实验结果影响很大,导致背景过高或者信号过弱,因此实验结果重复性不好; 有的人花上半年做一个体内的TUNEL是一点都不奇怪的。2),大部分诱导凋亡的药物也引起DNA损伤,从而产生DNA断裂,易引入假阳性;3)凋亡晚期细胞基因组大量降解,导致TUNEL标记反而减少,因此此法反应的是早期凋亡比例,不能严格反应凋亡比例,属于半定量研究。
尽管有如此多缺点,但由于其是目前为数不多的能原位标记凋亡细胞的方法,因此用于组织体内凋亡研究仍然是shou选。但体外细胞实验研究,很少用此法。
凋亡检测中,TUNEL并不是过时的方法,现在研究凋亡的文献仍然常见。而且相反,还比以前多一点,因为现在体内实验越来越多了,甚至线虫的凋亡研究,都用TUNEL。
凋亡研究中,的确有几种方法过时了,当然是因为有替代方案了,比如DNA ladder,电镜。至于Annexin V是不能用来和TUNEL一起评论的,前者用于细胞,而且主要是悬浮细胞,后者主要用于组织。虽然有人也做镜下的Annexin V观察,TUNEL的细胞staining,但这都不是主流。
回到lz的原帖,的确如大家所言,做贴壁细胞,不推荐用TUNEL。如果是经典凋亡途径,只是确定比例,用Z经典,Z常用的subG1法即可,如果是不确定是否是凋亡,用Annexin V,不过贴壁细胞用此法,要注意消化时间。
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