谁能说说用缓冲液，采用超声波破碎细胞的方法提取蛋白质的过程？谢谢

yongbuxiangsui 2010-08-11 细胞破碎仪浏览 885 次

破碎细胞后，提取上清液是否需用什么过滤？否则得到的上清液会有杂质。离心速度过大是否会使蛋白质沉淀？... 破碎细胞后，提取上清液是否需用什么过滤？否则得到的上清液会有杂质。
离心速度过大是否会使蛋白质沉淀？

精彩问答

lihui19891018 发布日期：2010-08-16

所用样品放在冰盒中，因为超声破碎会发大量的热，如果温度过高会使蛋白变性，设置功率，超4秒，停8秒，看你量的决定超的循环数，一般100次足够了。
要提蛋白的话不能说是用什么过滤，而是离心。
不知道楼上说的超声15秒能破碎多少细胞，反正我看没戏。
离心的话8000rpm就可以，当然看你提什么蛋白了，如果某一种蛋白的话，还学要做电泳之类的才可以彻底分开。
千万不要听楼上的，尤其是第二步，如果你辛辛苦苦提的蛋白给煮沸了，那蛋白不就变形了吗？你的工作就都白做了。

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时代的过逝节奏发布日期：2010-08-18

离心速度和时间不够

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ermost60386973 发布日期：2012-04-13

离心Z好在4度的环境下，离心液会产热的~~~

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与会者牧儇发布日期：2010-08-12

这个问题太简单了吧，呵呵。
用离心的方法去除杂质。有离心机吧？高速离心机20度20000g离心30分钟，取上清，杂质沉淀在离心管管底。具体过程如下：
1.超声：超0.2秒停2秒，超声15秒，样品放在冰上进行；如果超声后细胞提取液还浑浊不清，可重复以上步骤一次
2.煮沸10分钟，室温放置30分钟
3.按前面说的条件离心
祝好运！

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