翟淑萍
发布日期：2016-03-30
X小体检测及染色体组型分析（3学时）
实验目的（一）：X小体检测
1掌握X小体玻片标片制作方法，
2绘制X小体形态特征及所在部位。
3鉴定个体的性别，为进一步研究人类染色体畸变与疾病的关系提供基础方法、为遗4病临床诊断提供参考。
实验目的（二）：染色体组型分析
1掌握染色体组型分析的各种数据指标
2学习染色体组型分析的基本方法
实验原理：
（一）
1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞时，发现雌猫体细胞核膜边缘有一个可被碱性染料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常女性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中都有一个这样的小体，继而有人进一步发现所有哺乳动物(mammal;mammalian)雌体细胞中都有同样的一个小体。一般认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发生异固缩形成的，故而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。
Barr小体出现在哺乳动物(mammal;mammalian)雌性个体细胞的细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状态所致，Morishima等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色体与其他异染色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落后于其他常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质的数目是X染色体数减1。故可以根据X小体的有无、数目来鉴定胎儿的性别和性别畸形。
（二）
定义：染色体组型又称核型，是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群（亚种、种、属等）的体细胞内的整套染色体，按它们相对恒定的特征排列起来的图像。
核型模式图是指将一个染色体组的全部染色体逐个按其特征绘制下来，再按长短、形态等特征排列起来的图像。
染色组通常是指生物体细胞染色体所有可测定的表型特征的总称，包括染色体的总数，染色体组的数目，组内染色体基数、每条染色体大小、形态等。它是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。染色组型分析是对染色体进行分组，对核型的各种特征进行定量和定性的描述，如对染色体长度、着丝点位置、臂比和随体有无等。为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据 。
实验材料：
（一）口腔粘膜（男女）、发根细胞（女）。
（二）人染色体放大照片；或蚕豆或大麦等有丝分裂中期标本和显微摄影所得放大照片，要求染色体分散良好，无重叠或重叠很少，着丝粒、随体等形态清晰可辨。
实验器具和药品：
（一）
1.器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒温水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、牙签、滤纸、纱布等。
2.药品：95%乙醇、、改良碱性品红、盐酸喹吖、Macllvaine氏缓冲液、石蜡。
（二）
1.仪器用具：显微镜（附摄影装置）、冰箱、恒温水浴锅、135胶卷、载玻片、盖玻片、剪刀、镊子、解剖针、刀片及毫米尺、胶水、计算器、白纸。
2.药品试剂：无水酒精、70%酒精、冰乙酸、碱性品红、苯酚、甲醛、山梨醇、对二氯苯、1N盐酸、0.05%秋水仙碱。
实验步骤：
（一）
1.取材:受检查者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁净的牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，diyi次刮取物弃去，将第二次、第三次刮取物涂在干净的载玻片上。
2.固定:滴加固定液（95%乙醇:=1:1或直接用乙醇）固定20～30min，空气干燥。
3. 染色制片：滴加1～2滴改良品红于室温下染色10～20min（勿使干燥），加上盖片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。
4. 镜检：低倍镜下计数100个核膜完整，细胞不重叠，无核固缩的细胞；并在高倍或油镜下观察。若使用女性发根细胞，需选用带有毛囊的头发（约2cm长），再加一滴染液后加上盖玻片，洒精灯上微热，静置5min，后盖一滤纸压片。
5. 结果: 油镜下可见X小体为一致密的浓染小体。轮廓清晰，约1um，常附着于核膜边缘或靠边内侧，其形态有三角形、卵形、扁平形等。
正常女性间期细胞核中X小体比例约30%～50%，男性中则偶尔可见（2%），且不典型。
（二）
1 计数，沿边缘剪下染色体，编号
2 初步目测配对，分组
3 测量长度，计算相对长度、着丝粒指数、 臂比，相同的染色体间配对
4 将配对好的染色体排列并粘贴在纸上，每一组下面画一横线，在两端注明起止号，并在横线下的中部写明A-G组号，染色体从大到小编为1-22号，性染色体单独列为一组
组型分析实验方法：
1 染色体数目确定
2 染色体形态特征：
3 长度：、相对
4 相对长度=每条染色体的长度/全套染色体长度
5 臂比=长臂/短臂
6 着丝点指数=短臂/（长+短臂）
7 随体的有无
分组排队原则：
1 着丝粒类型相同，相对长度相近的分一组
2 同一组的按染色体长短顺序配对排列
3 各指数相同的染色体配为一对
