dna提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些

DNA的粗提取
①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室，至少24 h。
②取材 称取30 g菜花，去梗取花，切碎。
③研磨 将碎菜花放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min 。
④过滤 在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1 000r/min的旋转频率，离心25 min，取上清液放入烧杯中)。在4 ℃冰箱中放置几分后，再取上清液。
⑤加冷酒精 将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中，并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35 min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定
①配制二苯胺试剂 取0.1 mL B液，滴入到10 mL A液中，混匀。
②鉴定 取4 mL DNA提取液放入试管中，加入4 mL 二苯胺试剂，混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100 ℃)加热10 min 。在加热过程中，随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。
研磨液的配制方法
Tris：10.1 g(相对分子质量为121.14)，先加50 mL 蒸馏水溶解，用物质的量浓度为2 moL/L 的盐酸调至pH8.0，再加下述药品。
NaCl：8.76 g(相对分子质量58.44)
EDTA：37.2 g(相对分子质量372.24)
SDS：20 g(相对分子质量288.3)
待上述药品全部溶解后，再用蒸馏水定容至1 000 mL。
若在室温低于20 ℃时配制药液，SDS呈沉淀析出，此时需要加温，才能将SDS溶解。如果提前配制的研磨液出现了沉淀，则应加温使沉淀溶解后再使用。
研磨液中几种药品的作用
SDS(十二烷基磺酸钠):可使蛋白质变性，与DNA分离。
EDTA(乙二胺四乙酸二钠):为DNA酶的YZ剂，可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA。
物质的量浓度为0.15 moL/L的氯化钠溶液：能很好地溶解DNA。
Tris/HCl：提供缓冲体系，DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。(Tris为三羟甲基氨基甲烷)
鉴定DNA的其他方法 用紫外灯照射法鉴定DNA效果很好。具体鉴定方法如下。
1.配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭(EB)溶液。
2.将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴1滴EB溶液染色。
3.将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射(暗室中)，可见橙红色的萤光(DNA的紫外吸收高峰在280 nm处)。

1、 裂解液要预热，以YZDNase，加速蛋白变性，促进DNA溶解.
2、 酚一定要碱平衡.苯酚具有高度腐蚀性，飞溅到皮肤、粘膜和眼睛会造成损伤，因此应注意防护.氯仿易燃、易爆、易挥发，具有神经毒作用，操作时应注意防护.
3、 各操作步骤要轻柔，尽量减少DNA的人为降解.
4、 取各上清时，不应贪多，以防非核酸类成分干扰.
5、 异丙醇，乙醇.NaAc，KAc等要预冷，以减少DNA的降解，促进DNA与蛋白等的分相及DNA沉淀.
6、 提取DNA过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理.
7、 所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制.