高氯酸钠对于放线菌的dna提取有没有影响啊？我们已经提了几天都没有出现dna沉淀，不明白他有没有破坏作用。。。 方法如下：1.5~2g湿菌体，加入20ml 1×TES，充分打散菌体 ↓加入2mg溶菌酶 37℃水浴保温30-60分钟，温和摇动 ↓加入2ml 20% SDS (终浓度为2%)... 高氯酸钠对于放线菌的dna提取有没有影响啊？我们已经提了几天都没有出现dna沉淀，不明白他有没有破坏作用。。。 方法如下：1.5~2g湿菌体，加入20ml 1×TES，充分打散菌体
↓加入2mg溶菌酶
37℃水浴保温30-60分钟，温和摇动
↓加入2ml 20% SDS (终浓度为2%)
55℃水浴保温10分钟，然后冷却至室温
↓加入100μl蛋白酶K溶液
55℃水浴保温30-60分钟，温和摇动
↓加入5ml 5M NaClO4溶液
加入等体积(27ml) P:C:I混合液，充分振荡使其呈乳浊液，约30~60分钟
↓5000rpm，4℃，20-30分钟离心
用剪去枪尖的枪头吸取上层水相，转移至新的离心管中，重复用P:C:I抽提2-3次至没有蛋白膜出现为止
↓加入70μl RNase溶液
37℃水浴保温30-60分钟
↓
加入等体积的C:I混合液，充分振荡
↓5000rpm，4℃，20-30分钟离心
转移上层水相至烧杯中，冰浴，加入1/10体积预冷的3M NaAc-1mM EDTA-Na2及等体积的冷异丙醇，使DNA沉淀
↓用玻璃棒绕起DNA丝
望各位高手指点一二！！不胜感激。。
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