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怎样提取洋葱的DNA小实验

哈尔滨生殖保健    2018-03-30    核酸提取仪    浏览 1000 次

精彩问答
幻雪夜57 发布日期:2018-03-31
洋葱DNA的粗提取与鉴定
一、实验目的
1. 初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法,观察提取出来的DNA物质。
2. 通过与菜花实验的对比,分析实验材料和方法的优劣。
二、实验原理
1. {(DNA白色丝状物+蛋白质结合)存在于细胞核中},在2mol/L的氯化钠溶液中,核蛋白容解聚,游离出DNA。此时钠离子与带负电荷的DNA结合成DNA钠盐,DNA中呈溶解状态。
2. 通过机械研磨破坏细胞释放(DNA+蛋白)结合物,再用2mol/L Nacl溶液溶解出DNA。
3. DNA不溶于酒精,而细胞中某些物质溶于酒精,可以用酒精提取含杂质较少的DNA;
4. DNA中的嘌呤核苷酸中的脱氧核糖遇酸形成ω-羟基-γ-酮基戊醛,她和二苯胺试剂沸水浴条件下作用呈现蓝色,因此二苯胺可作为鉴定DNA 的试剂。
三、材料器具
洋葱,研钵,石英砂,漏斗,纱布,烧杯,玻璃棒,药匙,试管, 水浴锅 ,冰无水乙醇 ,二苯胺试剂
注:试剂要求
1. 无水乙醇提前放冰箱冷藏,可容易并且快速溶解DNA。
2. 二苯胺试剂A与二苯胺试剂B现用现混,A为强酸溶液,用时需小心,B液加A液中。A:B=100:1
四、实验步骤
1. 研磨液释放DNA
称取30克已切碎的洋葱,放入研钵中,加入少量石英砂助研,倒入10mL 2mol/L的氯化钠溶液,充分研磨。
2. 冰无水乙醇提取DNA
a) 研磨后,用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中,得到滤液。
b) 向滤液中加入冰的无水乙醇20mL,沿烧杯壁缓缓倒入,不要震动或搅拌。此时,烧杯中的液体分为上、下两层,下层较浑浊,上层澄清,很快上层溶液中就会有白色纤维状粘稠物析出,用玻璃棒可将其轻轻卷起。这就是记录生命遗传信息的重要物质——DNA。
3. 二苯胺鉴定DNA
a) 溶解DNA:用玻璃棒挑出白色絮状DNA转移到另一试管中,加2ml 2 mol/L的Nacl溶液使DNA溶解以液体形式呈现,便于鉴定。
b) 设置对照组:另外一试管中加2ml 2 mol/L的Nacl溶液作为对照。并对两只试管进行标记。
c) 二苯胺水浴鉴定:两只试管中各加2ml二苯胺试剂,在沸水浴中加热10min,观察颜色变化。
五、实验结果
加入白色絮状物的试管中颜色变为蓝色,另一对照试管中没有颜色变化,说明提取出了洋葱中的DNA。
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