透射电镜制样流程:
组织取材(60s内),体积<1mm3,之后进行如下步骤:
1、前固定:3%戊二醛2h或过夜。
2、漂洗:磷酸缓冲液,3次,10min/次。
3、后固定:1%锇酸固定液,2h。
4、漂洗:磷酸缓冲液,3次,10min/次。
5、梯度脱水:50%丙酮,70%丙酮,80%丙酮,90%丙酮两次,各
10min。丙酮两次,各15min。
6、渗透:丙酮/包埋剂(1:1,1:2),室温各1h。丙酮/包埋剂1:3, 4度过夜。纯包埋剂,4度过夜。
7、包埋:纯包埋剂(37度,45度,60度各24h)。取出包埋块,进行超薄切片,片厚70nm。分别采用醋酸双氧铀对切片进行染色30min,双蒸水漂洗3-5次,之后用柠檬酸铅染色10min,双蒸水漂洗3-5次。待切片干燥后,透射电镜观察。
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