1.5.由于目前的色谱柱性能优良,因此极不可能出现伸舌峰(伸舌峰的现象随着现今柱填充技术的提高已相当少见)。
伸舌峰一般是由柱过载或柱结构塌陷导致的(发生伸舌峰的一个原因是色谱柱内发生沟流或色谱柱结构的坍塌)。
如果在制造商推荐的条件下使用色谱柱,这种情况则很少发生。
大多数硅胶柱在pH2-8的范围内可以保持稳定。
pH低于2时,键合相会发生水解;pH高于8时,硅胶会溶解。
如果(如果您需要)在此pH范围以外使用(操作)HPLC系统,请确保选择在选定条件下会保持稳定的色谱柱。
图5显示了因柱过载(色谱柱发生沟流)导致的伸舌峰。
图5a中显示了正常的峰值形(峰形);在大约500次注射(进样)后,观察到伸舌峰(图5b)。
使用这种方法便会出现这种变化,并且在每次运行的过程中会经常出现(这种改变是该方法所特有,经常在前一次分析结束后,下一次分析开始时突然发生)。
出现伸舌峰后,唯yi有效的解决办法就是更换色谱柱。
该柱为100x2.1mm(直径(内径)),色谱柱填充5mC18颗粒(柱内填充5μm 粒径的C18填料) 。流动相A是10mM碳酸氢铵(pH9.0) ; B是甲醇(MeOH)。
该方法包括5%B等度洗脱段,接下来是80%B的冲洗(然后用80%B淋洗)。
这种特殊的色谱柱可专门用于高达100%的水流动相,且无封端。
当流动相pH值升高时,封端可保护硅胶免于溶解。
在这种情况下,所使用的色谱柱流动相pH应远高于推荐的范围,并且无需保护性封端。硅胶在pH为9时会逐渐溶解,直到柱床结构不再稳定,并且柱床会发生移动,
产生空隙(塌陷)或通道,而这又会导致图5b伸舌峰的形成。
可以使用较低的流动相pH或采用在较高pH下能够保持稳定状态的色谱柱,以避免这一问题(避免这一问题)。
图5. 过载导致的伸舌峰。(a)正常的峰形;(b)伸舌峰。来源[2]。
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