柱体积为LC柱内被洗脱剂占据的体积(即粒子之间的空间和粒子孔内空间)。
柱体积可根据以下公式计算:
Vm=πr2 Lε
其中:
Vm = 柱体积(单位:mL)
r = 柱半径(单位:cm)
L = 柱长度(单位:cm)
ε = 床层空隙度值
床层空隙度值ε取决于粒子参数(如孔径、表面积等)和供应商。
对于ACE 100 Å多孔柱,ε值为~0.63;
对于ACE 300 Å多孔柱,ε值为~0.75;
而对于ACE 90 Å实芯柱,ε值为~0.55.
在讨论柱平衡时,更准确的是引用达到稳定状态所需的柱体积,因为它与流速和柱尺寸(规格)无关。
例如,表1a示出了一系列ACE 100 Å多孔柱的柱体积值的计算。
柱长度 (mm) | |
柱ID号 (mm | 20 30 50 75 100 150 250 |
1.0 | 0.010 0.015 0.025 0.037 0.049 0.074 0.124 |
2.1 | 0.044 0.065 0.109 0.164 0.218 0.327 0.546 |
3.0 | 0.089 0.134 0.223 0.334 0.445 0.668 1.113 |
4.6 | 0.209 0.314 0.523 0.785 1.047 1.570 2.617 |
表 1a:ACE 100 Å多孔柱的体积计算值(单位:mL)
表2a显示了各种流速条件下,4个不同尺寸的ACE 100 Å多孔柱达到20和60倍柱体积平衡所需的时间。
柱尺寸和粒径 | 柱体积 (mL) | 流速 (mL/min) | 20倍柱体积平衡时间 (分钟) | 新色谱柱60倍柱体积平衡时间(分钟) |
50 x 2.1 mm, 1.7 µm | 0.109 | 0.21 | 10.4 | 31.2 |
50 x 2.1 mm, 1.7 µm | 0.109 | 0.50 | 4.4 | 13.1 |
100 x 3.0 mm, 3 µm | 0.445 | 1.00 | 8.9 | 26.7 |
150 x 4.6 mm, 5 µm | 1.570 | 1.00 | 31.4 | 94.2 |
150 x 4.6 mm, 5 µm | 1.570 | 2.00 | 15.7 | 47.1 |
250 x 4.6 mm, 5 µm | 2.617 | 1.00 | 52.3 | 157.0 |
250 x 4.6 mm, 5 µm | 2.617 | 2.00 | 26.2 | 78.5 |
表 2a:ACE 100 Å多孔柱平衡计算
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