抗体药研发与免疫原性的刀光剑影

       仇视，博弈，对决，厮杀，像极了武侠小说中的精彩场景，又《边城将》：“刀含四尺影；剑抱七星文。”，剑拔nu张，一片刀光剑影。

diyi章

抗体药腥风血雨

       正如我们今天要聊的抗体药研发，由大分子药物，小分子及多肽类药物，甚至是相关佐剂都可能直接或者间接引起比较大的免疫原性反应，轻者可能项目止步于临床前期甚至临床期，对经济投入可谓压力山大；重者则可能会降低药物LX，引起过敏反应，甚至威胁生命安全。故ADA（Anti-Drug-Antibody）——在PK研究的有效检测，即系统性、科学性地完成ADA检测是PK研究的迫切问题。

       近年来经常会有各种抗体药研发的新闻见诸报端，该市场可谓如火如荼，正值高光时期，从各大单抗药企的社会责任来看，正不遗余力解决民生问题，甚感欣慰。

第二章  

ADA检测、免疫原性指导，

你需要知道这些

       那我们遵循规则，来探讨一下ADA检测的特点，继2009版免疫原性指导原则之后，2016版FDA《免疫原性指导原则（试行）》的发布给免疫原性分析指明了方向，把两个相隔7年的制度原则进行比较，即可得到以下几点特征：

• 2016版指导原则推荐使用基于风险的方法来评价免疫反应及其带来的副作用；

• 筛选和确证试验的方法灵敏度至少达到100ng/mL，远远小于之前要求的250-500ng/mL；

• 对确证和滴度试验做了详细说明；

• 对方法学建立和验证的时间做了更加详细的说明；

• 增加了关于糖基化、Fc融合、ADC等内容的讨论；

• 对于生物类似药，要用一套标准试验来真实对比类似药和原研药的ADA水平。

综合几点，即FDA对免疫原性的评估指导给出了具体要求：

• 高灵敏度

• 高特异性

• 高稳定性

• 高亲和力

第三章

FDA的高要求，我们如何应对？

       结合以上几点特征，我们来看看目前通用的检测方法：

       对于抗体研究发展趋势，鼠源向人源化—全人抗体—多功能化（双/多特异性抗体）--小型化（抗体片段/肽段）--jing准化（抗体/药物偶联物-ADC），对分析技术的要求越来越高。

       常规分析技术一般包括直接或桥接酶联免疫吸附分析（ELISA）、电化学发光法（ECLA）、放射免疫沉淀分析（RIPA）、表面等离子体共振（SPR）等，可采取一种或几种组合。但由于受限于目前的技术瓶颈（如ELISA-酶联免疫法,ECLA-电化学发光法）检测灵敏度，即检测背景的受限和反应性检出能力的受限，再结合ADA的阶段性特点，不同时间段的抗体亚型存在差异性的；而且机体在给药后药物以及内源性分子浓度水平的“干扰”均会影响分析结果，故抗药性抗体分析方法应准确、灵敏、特异、耐用，能检测出包括IgG和IgM等所有亚型，同时基于风险采用多层次检测策略评价ADA，按照筛选分析、确证分析、中和分析等进行逐层分析。

第四章

秘籍出世——

默克帮您应对ADA检测的挑战

       目前默克生命科学依托其SMC单分子超高灵敏度检测平台，专门开发了ADA检测的专用方法学开发用检测试剂盒。

图1：SMC^TM免疫原性检测及开发试剂盒（Cat.No.03-0175-00）

图2：单分子计数，精确计数光子数量

图示3：Biotin-drug/AF-drug等摩尔滴定抗兔多抗呈阳性反馈，曲线设置12个点，CV<20%

图示4：Biotin-drug/AF-drug等摩尔滴定N/S Ratio，红色框中ADA在23.44ng/mL浓度下的表现出较好的信噪比和动

图5：为基质耐受检测，A为运行基质浓度为20%，10%，5%，0%的响应值，B为信噪比反馈

图6：对于标曲反馈，20%Matrix（1：5） Biotin-drug0.025µg/mL和AF-drug 0.025µg/mL为Z佳的确认结果

图7：相较传统ECL法，SMC检测灵敏度提高了十倍（从195ng/mL提升到20ng/mL）

*数据源于50只药物诱导猕猴样本

图8：数据表明没有证据证明hook效应会影响浓度低于100，000ng/mL的低敏感性范围

图9：药物耐受性检测：结果显示该实验降低了循环ZL的耐受性，可检出在0.125µg/mLMAb中约97.7ng/mL的ADA浓度

终章

结果的精确与否，就在你一念之间

       SMC的优势到底在哪里？

       看看你的结果，如果和FDA的要求相差甚远，SMC或许可以帮你找到答案。

       SMC技术相较于当前的ADA检测金标准提升了至少10倍的检测灵敏度。

       相较当前的方法可降低基质耐受并保持一致的药物耐受性。

       极大的降低试剂的消耗成本并可保持稳定的检测动力学范围。

       当前的数据并未做过多的优化，用户仍可通过试剂盒中标配的优化buffer进行进一步优化以实现更好的性能反馈。

       SMC提升ADA检测灵敏度有助于在免抗疫亲和力成熟和ADA类型转换之前检出ADA浓度。