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固相萃取-液相色谱法测定血液中的地西 泮

北京莱伯泰科仪器股份有限公司    2020-11-20    固相萃取仪    浏览 19 次

前言

地西 泮别名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓,是一种中 枢精神系统镇定剂,主要用于人和动物镇定催眠及癫痫的治疗。近年来,地西 泮在临床的应用越来越广泛,此类药物在中毒 药物中居首位,中毒和疑似中毒的病例常见,所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对血清中的地西 泮进行固相萃取、富集,用高效液相色谱仪进行检测。

本文参考《SPE-HPLC/MS/MS法检测人唾液中的地西 泮及其代谢产物》采用SPE1000全自动固相萃取系统,测定地西 泮的回收效果,实验证明,地西 泮回收率在90.5%~98.1 %之间,重现性RSD为2.7 %,回收率和重现性良好,说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定,适用于血液中的地西 泮样品前处理。


1、实验过程

1.1仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司);

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LC600高压高效液相色谱仪(莱伯泰科公司);

地西 泮,1000mg/L,坛墨质检;

甲醇(色谱纯);

乙酸铵(分析纯):配制成0.2mol/L,PH=6的水溶液;

C18固相萃取柱(60mg/3mL莱伯泰科);

实验用水:超纯水。


1.2 标准工作液的配置

取1mL地西 泮标品于10mL容量瓶中,甲醇定容,配置成浓度为100μg/mL的标准储备液。

取20 μL标准储备液,用甲醇定容到1mL,配制成2μg/mL标准工作液。


1.3实验方法

1.3.1 样品制备

取1mL血液,加入100 μL的标准工作液,混匀,使血样中地西 泮的加标浓度为200 μg/L,用水稀释到5 mL,涡旋5min,5000 rad/min离心10 min。取全部上清液,待固相萃取处理。

同时做样品空白。


1.3.2 固相萃取及浓缩

按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑,并加载方法到相应通道,进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中,氮吹浓缩至1mL以下,用甲醇定容至1mL,待测。

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图1   地西 泮的SPE 1000 方法


1.3.3 HPLC测定水中地西 泮

色谱柱:C18,5μm,4.6mm*150mm;

波    长:230nm;

流    速:1.0mL/min;

进样量:20μL;

流动相:甲醇:水=65:35V/V


2、实验结果

2.1  地西 泮色谱图

2.1.1地西 泮标品色谱图

图2为取100μL的标准工作液,用甲醇定容到1.0mL检测(200μg/L),地西 泮标品出峰色谱图,出峰时间为12.1min。

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图2  地西 泮标品出峰色谱图


2.1.2血液中地西 泮加标样品色谱图

图3地西 泮加标样品出峰色谱图,出峰时间为12.1min。 

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图3  地西 泮加标样品出峰色谱图


2.1.3血液中地西 泮样品色谱图

图4地西 泮空白样品出峰色谱图。

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图4  空白样品色谱图


2.2 HPLC测定血液中地西 泮回收率

HPLC测定血液中地西 泮回收率计算结果如下表,萃取富集后的回收率在90.5%~98.1 %之间,重现性RSD为 2.7%。

表1  血液中地西 泮的加标回收率(加标量200μg/L)

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3、实验结论

1、254nm和230nm的波长均可检测到地西 泮,但地西 泮在230nm波长下,信号响应最高。

2、SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品,其回收率和重现性良好,工作效率高,可应用于此类样品的前处理方法中。


4、参考标准

SPE-HPLC/MS/MS法检测人唾液中的地西 泮及其代谢产物

高效液相色谱法测定 地西 泮中毒患者血浆与血清中地西 泮浓度

固相萃取—反相高效液相色谱法同时测定人血清中地西 泮及氯硝西 泮

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