经验分享︱无需方法转换，常规HPLC色谱柱也能实现UHPLC分离性能

近年来，UHPLC系统在小分子分析中的应用已得到了研究人员的广泛认可。UHPLC系统是在常规HPLC系统上对死体积、进样性能和检测器采样率等方面进行了优化，能够承受超过1000 bar的操作压力。因此，对于在常规HPLC系统上开发的方法，使用UHPLC仪器和HPLC色谱柱更能够发挥优势。

如果在UHPLC系统上使用常规HPLC色谱柱，就不需要再去购买UHPLC色谱柱并开发新的方法，这样可以节省相当的成本和时间。

本应用展示了常规TSKgel HPLC色谱柱在UHPLC系统上出色的分离性能。

应用实例(一)

使用阳离子交换色谱柱TSKgel SP-STAT分别在HPLC系统(蓝色谱图) 和UHPLC系统 (红色谱图) 上，分析单克隆抗体IgG的情况。实验中采用了相同的色谱柱、样品以及分析方法，以验证色谱柱-系统的兼容性。

结果表明，SP-STAT色谱柱在UHPLC系统中的理论塔板数要高6%，明显优于在HPLC系统中的性能。

图1. SP-STAT色谱柱分析IgG的谱图

图2是使用SP-STAT色谱柱考察了在常规HPLC系统和UHPLC系统中，单克隆抗体异构体洗脱曲线被优化的程度。UHPLC色谱图的峰宽更窄。系统死体积减少导致峰洗脱早于HPLC系统。

图2. SP-STAT色谱柱分析mAb电荷异构体的洗脱曲线

应用实例(二)

图3是使用尺寸排阻色谱柱TSKgel G2000SWXL对标准蛋白混合物的分析情况。色谱柱在连接UHPLC系统时，对氨基苯甲酸 (PABA) 的理论塔板数超过了32000 (红色谱图)，而连接HPLC系统时，相同组分的理论塔板数只有29000 (蓝色谱图)。

图3. 标准蛋白混合物的分离谱图

当然，评估色谱性能时，分离度也是非常重要的一个指标。分析结果显示，在分离γ-球蛋白和卵清蛋白时分离度为2.1，分离核糖核酸酶A和对氨基苯甲酸时分离度为10.2。而观察UHPLC的数据可以发现，对应峰的分离度分别提高到了2.2和10.9。

总结

以上两个分析实例均表明，当使用UHPLC系统时，可获得分离更好、分辨率更高的分析结果。UHPLC系统仅仅是优化后的HPLC系统，因此从HPLC到UHPLC的方法转移并不比从一台HPLC仪器向另一台HPLC仪器转移要复杂多少。

以上应用中的操作压力远未超出常规HPLC系统的极限。大多数生物大分子的分离分析所采用的压力大抵如此，但许多生物样品分子本身无法承受太高的压力。利用HPLC技术的ZX发展趋势，将使用HPLC色谱柱已建立的HPLC方法转移到UHPLC系统是一种经济、省时的策略。