天津本生详述PCR技术原理、实验步骤和应用
实验目的
1.掌握聚合酶链式反应的原理。
2.掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。
二、实验原理
PCR技术,即聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)是由美PECetus公司的KaryMullis在1983年(1993年获诺贝尔化学奖)建立的。这项技术可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍,这种迅速获取大量单核酸片段的技术在分子生物学研究中具有举足轻重的意义,大地推动了生命科学的研究进展。它不仅是DNA分析zui常用的技术,而且在DNA重组与表达、基因结构分析和功能检测中具有重要的应用价值。
PCR可以被认为是与发生在细胞内的DNA复制过程相似的技术,其结果都是以原来的DNA为模板产生新的互补DNA片段。细胞中DNA的复制是个非常复杂的过程。参与复制的有多种因素。PCR是在试管中进行的DNA复制反应,基本原理与细胞内DNA复制相似,但反应体系相对较简单。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
三、实验试剂与器材
模板DNA、2.5mmol/LdNTP
TaqDNA聚合酶(5U/μL)、SSR引物
10×buffer、15mmol/LMg2+、ddH2O
PCR仪、移液枪、PCR板
四、实验步骤
1、配制20μL反应体系,在PCR板中依次加入下列溶液:
模板DNA2μL
引物11μL
引物21μL
dNTP1.5μL
MgCl22μL
10×buffer2μL
ddH2O10μL
Taq酶0.5μL
2、设置PCR反应程序。
3、上样,启动反应程序。
4、扩增产物的电泳检测。
PCR技术原理、实验步骤和应用!先和大介绍到这,如果想要了解更多PCR的信息,可以关注天津本生生物,专业给生物医药客户提供生物实验室检测耗材,欢迎广大客户来询。
天津市泰斯特仪器有限公司报价表(2020年)编号型号名称品牌市场价工作室尺寸(外形尺寸)宽×深×高(mm)电
天津艾维欧科技发展有限公司公司产品报价表(2020年)编号型号名称品牌市场价规格说明A0647158MS-1
本生详述YL器械经营管理平台(GSP平台)系统开
天津本生详述PCR管产品特征及用途 本生生物公司供应:elisa试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸
天津本生详述冻存管的使用方法和注意事项! 冻存管又称菌种保存管、磁珠保存管、磁珠冻存管。微生物实验室常用的菌种
天津本生详述:如何正确使用移液器? DY步:移液器枪头的安装 移液器枪头的安装比较简单,常用的方法是旋转安装,把
ELISA实验之洗涤要点! 洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠
核酸提取耗材深孔板,磁套的组成及特点? 深孔板规格: 96孔方孔尖底深孔板 96孔方孔尖底深孔板(灭菌) 96孔尖底
0.1ml pcr单管 V101-C—天津本生本生(天津)健康科技有限公司供应:移液器吸嘴,离心管,冻存管,培养
血清的主要成分和功能 牛血清在细胞培养中对细胞的生长增殖具有重要甚至是难以替代的作用,它含有丰富的细胞生长必须