细胞培养 | 细胞房的构建及常用设备入门攻略，一文全部掌握！

       细胞培养是进行细胞生物学研究时最基础的实验，是将离体的组织细胞置于模拟在体内生存的环境中，让其生长和发育的方法。现代生物技术（基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术等）的发展与细胞培养有着紧密联系，然而细胞培养对无菌等条件的要求高于普通的微生物培养，实验习惯和操作要求也有不同的标准，因此细胞房（细胞培养室）在建设时须要遵守一定的基本原则。

01细胞房的构建

       在细胞房内进行实验时需严格保持无菌操作，以避免微生物及其他有害因素的影响。工作环境需保持清洁、干燥和无烟尘。一般细胞房有五个工作区：无菌操作区、孵育区、制备区、清洗消毒灭菌区和储藏区。

洁净室（区）空气洁净度级别表

1、无菌操作区：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作，能与外界隔离，不能受到穿行或受其他干扰。一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。

• 更衣间：提供更换实验服、鞋子及穿戴帽子、口罩和手套。

• 缓冲间：位于更衣间与操作间之间。 目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置细胞培养箱及某些必需的小型仪器。

• 无菌操作间：专用于无菌操作、细胞培养。

2、孵育区：孵育区对无菌的要求虽没有无菌区严格，但仍需保持清洁无尘。因此也应设置在干扰少且非来往穿行的区域。孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行。

3、制备区：主要进行培养液及有关培养用的液体制备。

4、清洗和消毒灭菌区：应与其他区域分开，主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。

5、储藏区：主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等设备。此环境同需要清洁无尘。

02细胞房常用设备

1、超净工作台：也称为净化工作台。不同的品牌的超净工作台工作原理大致相同，通常是将室内空气经粗过滤器初滤，然后由离心风机压入静压箱，再经空气过滤器精滤。由此送出的洁净气流以一定均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。一般使用的净化工作台主要有两种：

• 侧流式或称垂直式

• 外流式或称水平层流式。

2、显微镜：倒置显微镜是细胞房必需的日常工作常规设备，用于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。

3、超纯水机：细胞培养对水的质量要求较高。细胞培养用水一般要求双蒸水（0.8MΩ以上），纯化时可采用离子交换装置或蒸馏器。

4、单细胞悬液制备仪：可将组织制备成高活性单细胞悬液或组织匀浆。广泛应用在单细胞测序、原代细胞培养、流式分析、细胞分选、细胞诊疗等研究领域。

5、CO₂培养箱：CO₂培养箱是细胞培养中必不可少的设备，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、CO₂浓度和湿度等。细胞在体外培养时容易受到各种细菌、微生物的污染，因此，CO₂培养箱的灭菌能力就显得尤为重要。RWD D180-P二氧化碳培养箱，具备高达140℃的高温干热灭菌系统！

6、干燥箱：培养箱的相关器械、器皿在日常清洁中需要消毒、烘干后使用，因此细胞实验室必须配备干燥箱才行。常见的干燥箱是鼓风式电热干燥箱，其优点在于温度均匀、干燥效果较好。

7、冰箱：细胞实验室中的冰箱分为普通冰箱/冷藏柜和低温冰箱两类。其中，低温冰箱温度控制跨度在-40℃~-150℃左右，常用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂，如酶、血清以及一些动物样品等。

8、液氮罐：为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或是细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-196℃，因此，需要液氮罐对细胞进行保藏。

9、恒温水浴：从液氮或超低温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于37℃水浴中快速复苏之后才传代培养，因此，恒温水浴是细胞实验室必备仪器。

10、自动细胞计数仪：细胞计数是细胞生物学研究中的一项基本实验技术，通过细胞计数仪可以准确快速地计算细胞浓度、了解培养细胞状态、绘制生长曲线等。

11、消毒器：直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。常用高压蒸汽灭菌锅，手提式高压蒸汽消毒器。

12、器械：主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。常用的有：手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪（弯剪及直剪），眼科虹膜小剪（弯剪或直剪），血管钳及组织镊、眼科镊（弯、直）等。瑞沃德动物手术器械，质量好助力工作效率提升。

ps：其他设备可参考具体实验需求。

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