多重PCR技术要点解析

多重PCR概述

多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其基本原理与常规PCR相同，区别在于多重PCR反应体系加入一对以上引物，各对引物分别结合在模板相对应部位，最终扩增出一条以上目的DNA片段。

多重PCR的特点

•高效性：在同一PCR反应管内同时检出多种基因，或对有多个型别的目的基因进行分型，特别是微量样本的多基因检测。

•系统性：多重PCR适宜于成组病原体的检测，如肝炎病毒，肠道致病性细菌，性病，无芽胞厌氧菌，战伤感染细菌及细菌战剂的同时侦检。

•经济简便性：多种病原体在同一反应管内同时检出，将大大的节省时间，节省试剂，节约经费开支。

多重PCR应用

•基因诊断、肿瘤诊断、病原微生物的检测。

•基因分型、连锁分析。

•植物分子育种、基因表达检测、病虫害检测。

•病原菌污染检测。

•区域捕获测序。

多重PCR之难

多重PCR并不是单纯的将多对特异性引物混合成一个体系。多重PCR之所以难，在于多个靶点之间扩增条件不兼容，每个靶点都需要旁边其他的引物配合。

就像是三人两足游戏一样，每个靶点成功扩增都是需要绑在一起的两个人（一对引物）默契配合。而多重PCR就需要所有的选手同时起跑又同时到达，并且所有的选手都达到发挥。

多重PCR优化

为了达到更好的扩增效果，一般可以通过以下几个方面进行优化。

◆引物的优化：

◆反应体系：

◆反应条件：

◆常见问题解决办法：

多重PCR要求在同一反应体系内对多个位点进行特异性扩增。因而引物间的配对与竞争性扩增均会影响扩增效果。如果能选择合适的反应体系、反应条件以及更合适的PCR仪，则有望提高多重PCR的扩增效果。所以在进行多重PCR的时候，不应墨守成规，要根据自身实验情况对实验条件进行不断优化，达到扩增效果。