超微量测蛋白质，重复性不好的原因在这里。

导读

超微量分光光度计常用于核酸纯度分析、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量，蛋白质重复性不好是我们遇到的最多的问题。

今天，我们从超微量分光光度的测样原理来分析一下这个问题。

一般来说，在进行超微量分析时，需要用移液枪将1-2 μL的蛋白质样品加到样品台上。

利用蛋白质的表面张力，采用样品拉伸原理，使样品形成液柱，从而进行检测。

殊不知这个过程就是影响蛋白质测定准确性和重复性不好的关键因素，几乎可以影响到蛋白质表面张力的因素都可导致其测试结果的不稳定。

现将这些因素总结如下：

元析B-600超微量分光光度计主机

B-600超微量分光

光度计蛋白质测量方法界面

01

温度导致样品挥发

首先，液体的温度与分子间引力有一定的关系。

温度升高，分子间引力将减弱，表面张力也会随之降低。这也解释了为何低温保存的核酸样品，更易形成液柱。

所以，要得到理想的测试效果，首先要确保实验室环境的温度和湿度，要预防仪器本身的发热对样品的影响。

然而，一款拥有封闭式点样台的超微量分光光度计可避免这一问题。

02

盐

无机盐作为一种非表面活性剂，具有水合作用，趋向于把水分子拖入水中,因此会增大表面张力，反之亦然。

因此，脱盐或低盐的样品，表面张力会降低，常见于蛋白纯化的流程。

例如在进行蛋白质结构分析或质谱分析时，样品需经过脱盐处理，这样的样品在进行浓度测量时，并不容易形成液柱。

03

表面活性剂

蛋白提取过程中经常使用的表面活性剂（清洁剂），如SDS、Triton X100，会大幅降低样品的表面张力，这些物质常会残留在样本中，难以完全去除。

尤其一些非离子型表面活性剂对蛋白质在界面吸附性的影响更加值得考虑。

04

固液接触表面

当使用移液器将微量样品加载到点样台后，会出现液体与固体的接触表面，点样台表面的亲水/疏水性质会影响液体的表面张力。

因此，使用拉伸法的主流品牌微量分光光度计，点样台表面具有疏水性涂层，会增大液体的张力。