动物性食品中β-受体激动剂残留的检测
迪马科技
β-受体激动剂能促进脂肪分解,抑 制脂肪沉淀,显著提高酮体的瘦肉率,因此曾被用作畜禽的促生产剂。但这类药物易在动物体组织内残留,通过食物链进入人体,引起食物中毒。我国自2002起,已经将盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等列为禁用药品,并列入年度例行监测计划。
迪马科技参考国标GB 31658.22-2022,建立了SPE-UPLC-MS/MS法,测定动物性食品中β-受体激动剂的残留,该方案通过对动物性食品酶解、高氯酸沉淀蛋白,经乙酸乙酯、叔丁基甲醚萃取,ProElut PXC净化, Inspire PFP色谱柱分离检测,回收率在70%-120%之间。
本方案具有提取方法回收率高、净化效果优异、方法稳定性好等优点。
1、适用范围
本方案适用于猪肉、猪肝中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑丙罗、妥布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗、克仑潘特、羟甲基克仑特罗共18种β-受体激动剂单个或混合物残留量的检测。
2、标准品
(1) 混标储备液:精密称取适量克伦特罗等标准品,用甲醇溶解并定容,配制成浓度为100μg/mL混标储备液(Cat.#: 47936);
(2) 混标中间液Ⅰ:准确吸取适量混标储备液,用甲醇稀释并定容,配制成浓度为0.1μg/mL混标中间液;
(3) 混标中间液Ⅱ:准确吸取适量混标中间液Ⅰ,用甲醇稀释并定容,配制成浓度为0.01μg/mL混标中间液;
(4) 内标储备液:精密称取适量克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3、西马特罗-D7、齐帕特罗-D7、氯丙那林-D7、特布他林-D9、西布特罗-D9、盐酸马布特罗-D9、盐酸班布特罗-D9、克仑丙罗-D7、盐酸妥布特罗-D9、羟甲基克仑特罗-D6,用甲醇溶解并定容,配制成浓度为10μg/mL内标储备液;
(5) 内标工作液:准确吸取适量内标储备液,用甲醇稀释并定容,配制成浓度为0.1μg/mL内标工作液。
3、提取
(1) 称取样品2.0g于50mL塑料离心管中,加6mL 0.2mol/L乙酸铵缓冲液、40μL β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶,涡旋混匀,37℃避光水浴16h,放置室温,备用;
(2) 取备用液,加100μL内标工作液,涡旋混匀,8000rmp离心8min,取出上清;
(3) 向下层残渣加入5mL 0.1mol/L高氯酸溶液,涡旋5min, 8000rmp离心8min,取上清,与步骤(2)上清混匀,用高氯酸调pH值至1.0±0.2,8000rmp离心8min,取出上清;
(4) 将上清液用10mol/L NaOH溶液调pH值至10.0±0.5;
(5) 加乙酸乙酯15mL,涡旋5min, 5000rmp离心5min,取上层有机相;
(6) 下层水相中再加入10mL叔丁基甲醚,涡旋5min, 5000rmp离心5min,取上层有机相;
(7) 合并两次有机相,混匀,50 ℃水浴氮吹至干,用5mL 2%甲酸溶液超声1min,涡旋1min溶解残渣,备用。
注:0.2mol/L乙酸铵缓冲液:取乙酸铵15.4g,溶解于1000mL水中,用乙酸调pH值至5.2;
0.1mol/L高氯酸溶液:取高氯酸8.7mL,用水稀释至1000mL。
4、净化
ProElut PXC 60mg/3mL (Cat.#: 68203)
(1)活化:用3mL甲醇和3mL 2%甲酸溶液活化小柱;
(2)上样:将备用液全部上柱,弃去流出液;
(3)淋洗:用3mL水和3mL甲醇淋洗小柱,弃去流出液,推干;
(4)洗脱:用3mL 5%氨水甲醇洗脱小柱,推干,接收流出液,混匀;
(5)重新溶解:将流出液在50℃水浴氮吹至近干,用0.5mL 甲醇-0.1%甲酸水(1:9)溶解残渣,混匀,过尼龙膜(Cat.#: 37177),上机分析。
5、分析条件
UPLC 条件
色谱柱:Inspire PFP,100x2.1mm,3μm (Cat.#: 81612)
流 速:0.3mL/min
进样量:5μL
柱 温:35℃
流动相:A: 0.1% 甲酸水溶液 B: 0.1% 甲酸乙腈
质谱条件
电离模式:ESI
扫描方式:正离子扫描
检测方式:多反应监测
电喷雾电压:5500V
雾化气压力:50psi
辅助气压力:50psi
气帘气压力:20psi
离子源温度:500℃
注:溴布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗和克仑潘特采用莱克多巴胺同位素内标定量,如果有5种药物一一对应的同位素内标,优先采用。
6、添加回收结果
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