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MBP标签:深度解析其蛋白大小、序列及其在生物技术中的应用

北京义翘神州科技股份有限公司    2024-01-16       浏览 81 次

MBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。

 

MBP标签序列:396 AA

 

纯化:融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。结合亲和力在微摩尔范围。一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效结合,而其他融合蛋白则不受影响。缓冲条件为pH7.0到8.5,盐浓度可高达1M,但不能使用变性剂。如果要去除MBP融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。

 

 

mbp标签优缺点:

简单亲和纯化即可实现;

增加蛋白表达量和蛋白稳定性;

促进蛋白的可溶性和正确折叠;

标签较大,对蛋白的结构/功能会有一定影响。

 

常见的蛋白标签:

 

常见的融合标签包括谷胱甘肽S-转移酶 (GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、几丁质结合蛋白(CBD)、硫氧还蛋白(Trx)、链霉亲和素、多聚组氨酸(Poly-His)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)和血凝素标签(HA)。

 

GST:

 

GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解-毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然大小为26KD。将它应用在原核表达的原因大致有两个,一个是因为它是一个高度可溶的蛋白,希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性;另一个是它可以在大肠杆菌中大量表达,起到提高表达量的作用。GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达,可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用10mM 还原型谷胱甘肽洗脱。在大多数情况下,融合蛋白在水溶液中是可溶的,并形成二体。GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。在大多数情况下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。纯化:该表达系统表达的GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathionesepharose)亲和树脂进行纯化。GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱,因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力,因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如:盐酸胍或尿素等。如果要去除GST融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。检测:可用GST抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。

 

HA:

HA标签蛋白,标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇,9个氨基酸,对外源靶蛋白的空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti-HA抗体检测和ELISA检测。用HA peptide可实现带HA tag的蛋白洗脱,0.15M Arginine-HCl缓冲液, pH3.0可实现蛋白纯化beads 的重生。

 

……

 

更多关于蛋白标签详情可以关注:https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag


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