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Trx标签蛋白:深度解析与常见问题解答

北京义翘神州科技股份有限公司    2024-01-19       浏览 82 次

硫氧还蛋白(Thioredoxins)是一系列广泛存在于生物体内的氧化还原酶,它能通过置换硫代二硫化物来减少二硫键的结合。常用作融合表达标签的硫氧还蛋白A(TrxA), 分量为11.6kDa,来源于大肠杆菌。

 

TrxA标签最独特的优点是它的热稳定性。TrxA本身不作为亲和标签来进行重组蛋白优化,而是通过在高温条件下将杂蛋白变性去除而重组蛋白得以保存。TrxA也具有极好的促溶效率,用作促溶标签时可将重组蛋白的可溶性表达从12%提高至95%。

 

下面是针对trx标签常见问答解析:

 

 

①trx标签蛋白序列

 

MSDKIIHLTD DSFDTDVLKA DGAILVDFWA EWCGPCKMIA PILDEIADEY QGKLTVAKLN IDQNPGTAPK YGIRGIPTLL LFKNGEVAAT KVGALSKGQL KEFLDANLAG SGSGHMHHHH HHSSGLVPRG

 

②带有trx标签会不会影响蛋白的抗原性

 

有可能的,trx标签是比较大的融合标签,有20多KDa,非常有可能改变蛋白的抗原决定簇。

一般为了不影响蛋白的功能,会在trx标签和目标蛋白之间加一个酶切位点,比如肠激酶的位点DDDDK,把trx标签去除掉。

 

③TRX标签蛋白怎么纯化

 

一般这个载体中都会有His 标签,直接用镍柱纯化即可

 

④常见的蛋白标签有哪些?有什么特点?

 

常见的蛋白标签有His-Tag、FLAG-Tag、HA-Tag、Myc-Tag、SUMO-Tag……

 

His-Tag

主要应用:蛋白纯化优选,也可用于检测。

特点:

• 分子量小,不影响目的蛋白的可溶性、结构和功能。

• 可在非离子型表面活性剂存在/变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用,后者在纯化包涵体蛋白时表现突出。

• 可应用于多种表达系统,纯化的条件温和。

• 可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。

• 免疫原性相对较低。

 

FLAG-Tag

主要应用: 广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域,在真核表达系统中表达效率更高。

特点:

• 分子量小,不影响融合蛋白功能,比同类标签更具亲水性。

• 目的蛋白可直接通过FLAG标签进行亲和层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性的融合蛋白且纯化效率高。

• 可以被抗FLAG抗体所识别,便于通过WB、ELISA等方法对含有FLAG标签的融合蛋白进行检测、鉴定。

• 融合在目的蛋白N端的FLAG标签,其可以被肠激酶切除(DDDK),从而得到特异的目的蛋白。

 

更多关于蛋白标签详情可以参看:https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag

 

义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索“义翘神州”与我们取得联系。

 


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