2025-01-10 10:53:59脂质纳米颗粒制备
脂质纳米颗粒制备是一种将核酸(如mRNA、DNA)与特定脂质材料结合,形成纳米级颗粒的技术。该过程通常在适当的条件下进行,以确保颗粒的稳定性和生物相容性。脂质纳米颗粒具有高效包载核酸、保护其免受降解、增强细胞摄取等特性。通过精确控制制备条件,可以优化颗粒的粒径、表面电荷等理化性质,从而提高其生物利用度和安全性。脂质纳米颗粒制备技术在基因治疗、疫苗开发等领域具有广泛应用前景。

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2023-05-25 16:47:05【ALP-TS-23008A】脂质纳米粒制备及表征解决方案
全文共3826字,阅读大约需要12分钟脂质纳米粒简介脂质纳米粒(Lipid Nanoparticle,LNP)是一种粒径介于 10-1000 nm 的新型药物递送载体,由多种有机材料、无机材料、金属 - 有机框架或这些材料组合而成,可作为化学与生物制剂之间传递的媒介,脂质纳米粒包裹药物可显著提高药物的稳定性与生物利用度。[1]目前脂质纳米粒广泛应用于mRNA疫苗递送、肿瘤治 疗、抗 炎和抗感染药物载体、治 疗神经退行性疾病、抗疟等领域。脂质脂质纳米粒可分为固体脂质脂质纳米粒(Solid Lipid Nanoparticles,SLN)和纳米结构脂质载体(Nanostructured Lipid Carriers,NLC)。固体脂质脂质纳米粒(SLN)主要是由固体脂质、表面活性剂、有效成分和水制备的胶体颗粒,具有生物相容性好、有机溶剂使用少、体内稳定性高、应用范围广等优点。但在储藏过程中仍存在载药量低、易凝胶化和药物泄漏等问题;为此,研发人员尝试在固体脂质壁材中加入一定量的液体油脂,打乱了原来单纯固体脂质壁材的有序的晶体结构,负载活性成分的量得到了提高,也使得晶体结构更加稳定,不易发生泄露等现象。[2-3]图1 LNP的结构[3]脂质纳米粒靶向性研究是药物递送热点研究方向之一,考虑到纳米药物自身性质的影响,可通过对其自身物理化学性质进行调控,如粒径、表面电荷、表面修饰物等,以此来增加脂质纳米粒药物的渗透作用。目前还开发了各种粒径可调控的纳米递药系统,Li 等[4,5]构建了一种酸刺激响应型脂质纳米粒,可以在低 pH 条件下将其粒径从 100 nm 缩减到5 nm。脂质纳米粒的初始尺寸有利于长时间的血液循环,当到达肿瘤部位后,酸性环境刺激脂质纳米粒发生结构变化,粒径缩小,有助于脂质纳米粒外渗和组织渗透。除 pH 响应外,肿瘤组织处特异的酶环境、肿瘤细胞内的还原环境和光、热、磁等外部刺激都可以用于调控纳米药物的粒径和表面电荷。[5]除平均粒径外,脂质纳米粒的尾端大颗粒和过小颗粒也会影响纳米药物的效果,尾端大颗粒容易造成脂质纳米粒聚集,影响药物的稳定性和安全性,小颗粒(<5nm)会被直接脏快速地过滤清除,影响药物的有效性。过滤可有效减少脂质纳米粒药物中的大颗粒和杂质,提高脂质纳米粒药物的稳定性。Alpharmaca奥法美嘉平台提供整套的脂质纳米粒均一性和稳定性的解决方案,可用于快速评估、优化脂质纳米粒的配方和工艺:高压微射流均质机、微流控技术对脂质纳米粒进行均质乳化分散处理、Nicomp粒度分析仪分析平均粒径、AccuSizer颗粒计数器分析大粒子浓度,Lum稳定性分析仪快速分析脂质纳米粒药物稳定性,Entegris-ANOW滤芯过滤杂质及大颗粒。脂质纳米粒的制备技术传统的脂质纳米粒制备技术,包括乙醇注入法、薄膜分散法、逆向蒸发法、冻融法等,存在粒径分布广和批间重复性大等问题,对药物开发的临床试验和生产具有很大的影响。为了解决传统制备方法的弊端,微流控混合技术、高压微射流技术、高压均质等新型制备技术应运而生。高压微射流制备方法:制备水相、油相,经过混合、剪切步骤形成初乳,初乳经微射流均质机均质,而后除 菌过滤得到脂质纳米粒。微流控混合技术制备方法:制备水相、油相,将水相油相经过微流控均质乳化后,除 菌过滤得到脂质纳米粒。无论是通过何种方法制备脂质纳米粒药物,后续都需要对其平均粒径、尾端大颗粒、稳定性进行检测来筛选配方,PSS的Nicomp粒度分析仪可用于测试平均粒径、AccuSizer颗粒计数器可用于测试大颗粒浓度、Lum稳定性分析仪可用于快速筛选在不同工艺制备下脂质纳米粒药物的稳定性。图2 高压微射流法制备脂质纳米粒图3 微流控混合技术法制备脂质纳米粒脂质纳米粒的粒径控制脂质纳米粒的粒径与其靶向性和有效性紧密相关,粒径小且分布窄是脂质纳米粒药物的理想粒径。微流控技术通过微米通道控制流体的流动和混合,具有良好的单分散性、可控性及重现性,可改善脂质纳米粒的均一性和药物包封效率,并实现高通量生产,已成功应用于Covid-19 mRNA 疫苗的制备[6]。高压微射流均质技术使物料在高压作用下以高速度流经腔体,经过剪切、碰撞、空穴效应等物理作用降低脂质纳米粒的平均粒径,可对脂质纳米粒初乳进一步均质分散。高压微射流均质机PSI-20高压微射流均质机(小试兼中试型)采用固定结构的均质腔,通过电液传动的增压器使物料在高压作用下以极大的速度流经交互容腔的微管通道,物料流在此过程中受到高剪切力、高碰撞力、空穴效应等物理作用,使得平均粒径降低、体系均一稳定,由此获得理想的均质、分散、去团聚的结果。图4 PSI高压微射流均质机最 高2069 bar的均质压力,最 高处理量20L/h(PSI-20)采用特殊设计Y型腔,去除尾端大颗粒效果佳,物料的混合更均一,处理效率高。屏显界面,数据可溯源:支持数据导出设定压力及实时压力、监测点温度、实时流量、时间等。配置K型热电偶:可用于实施监测料液温度。低噪音:运行音量低于70分贝,工作环境友好型。NanoSpirit 系列微流控药物制剂递送平台微流控制备系统通过制造泵和高压输送泵与微流控芯片连接。A相和B相可以按一定比例以恒定速度混合和乳化。在微流控芯片中,设计不同的流道结构,控制不同的速度,使样品在微流控芯片中湍流、层流或雾化,可以满足预乳化或再乳化的要求。还可以将制备好的样品通过高压泵输送到高压微流控芯片中,通过冲击力和剪切力控制粒径,达到达到所需的包封率、粒径、粒径分布均一性等要求。图5 NanoSpirit 系列高精度流量控制(<5‰)。可提供多项可调参数( 反应量、流速等)。多型号微流芯片通用,适合多种载体类型。注射器规格:0.25,1,2.5,5,10 ml。自动充液、反应、前后排废、清洗等工能平均粒径与Zeta电位检测脂质纳米粒径不同使药物富集在不同部位可现不同治 疗 效果。应用于肿瘤治 疗领域的脂质纳米粒,由于肿瘤组织处血管丰富,血管壁间隙较宽且结构完整性差,具有适宜尺寸的脂质纳米粒(60-200 nm)可通过 EPR 效应在肿瘤处积聚,实现纳米药物的被动靶向。脂质纳米粒电性一般呈中性或轻微负电性,在血液循环中,高正电性的脂质纳米粒会吸附蛋白质,被迅速清除,进而影响脂质纳米粒的药代动力学和生物分布。相比之下,中性脂质纳米粒以及带有轻微负电荷的脂质纳米粒则显示出延长的半衰期。Zeta电位是衡量药物稳定性指标之一,Zeta电位的绝 对值越高,体系越稳定。Nicomp纳米激光粒度仪系列Nicomp系列纳米激光粒度仪采用动态光散射原理检测分析样品的粒度分布,基于多普勒电泳光散射原理检测ZETA电位。图6  Nicomp 3000系列粒径检测范围0.3nm-10μm,ZETA电位检测范围为+/-500mV搭载Nicomp多峰算法,可以实时切换成多峰分布观察各部分的粒径。高分辨率的纳米检测,Nicomp纳米激光粒度仪对于小于10nm的粒子仍然显示较好的分辨率和准确度。图7  高斯粒径分布图                      图8  多峰粒径分布图颗粒分布检测尾端大颗粒的存在会影响药物本身的稳定性,由于表面积增大,使得体系形成热力学不稳定体系,容易发生脂质纳米粒聚集以降低体系自由能现象。尾端大颗粒的存在还会对身体机能造成影响,较大的颗粒(> 200 nm)容易积聚在肝脏和脾 脏中,影响药物安全性;粒径极小(< 5 nm)的颗粒则会被肾脏快速地过滤清除,影响药物的有效性。AccuSizer颗粒计数器系列AccuSizer系列在检测液体中颗粒数量的同时精确检测颗粒的粒度及粒度分布,通过搭配不同传感器、进样器,适配不同的样本的测试需求,能快速而准确地测量颗粒粒径以及颗粒数量/浓度。图9 AccuSizer系列检测范围为0.5μm-400μm(可将下限拓展至0.15μm)。0.01μm的超高分辨率,AccuSizer系列具有1024个数据通道,能反映复杂样品的细微差异,为研发及品控保驾护航。灵敏度高达10PPT级别,即使只有微量的颗粒通过传感器,也可以精 准检测出来。可出具法规报告LumiSpoc单粒子颗粒计数器LumiSpoc采用单粒子光散射技术(SPLS),通过在光学流通池中进行流体动力聚焦,将单个粒子排列成一条直线。通过调整流动条件来调整样品浓度,从而避免浓度峰值的影响。当单个纳米或者微米颗粒经过特殊光束截面的激光束时,记录其正向和侧向散射的光强。根据米氏理论,将分类强度转换为粒度分布密度。通过软件分析显示计数分布、颗粒浓度。在行业内已有使用Lumispoc用于颗粒浓度的监测成功案例。图10 LumiSpoc单粒子颗粒计数器颗粒粒径检测范围:50 nm ~ 8 µm(取决于样品)颗粒浓度检测范围:1 × 106 ml-1 ~ 1 × 109 ml-1进样体积:250 μl稳定性分析检测稳定性是评价药物制剂质量的重要指标之一,也是确定药物制剂使用期限的主要依据。药物制剂若发生分解、变质,可导致药效降低,甚至产生或增加毒副作用,危及患者的身体健康和生命安全,Zeta电位、尾端大颗粒浓度都是衡量药物稳定性的指标之一。除此之外,还可以使用稳定性分析仪测量样品的分离、沉降、悬浮或澄清、浮离、聚集、凝聚或产品存放期以及粒径分布。LUM稳定性分析仪Lum稳定性分析仪可以直接测量整个样品的分散体的稳定性,检测和区分各种不稳定现象,如上浮、絮凝、聚集、聚结、沉降等,通过测量结果可用来开发新的配方和优化现有的配方及工艺。图11 LUM稳定性分析仪快速、直接测试稳定性,无需稀释,温度范围宽广可同时测8个样品,测量及辨别不同的不稳定现象及不稳定性指数加速离心,最高等效2300倍重力加速度过滤经高压微射流均质机或微流控技术处理的脂质纳米粒,还需进行适当的过滤工艺,用于去除脂质纳米粒药物中的尾端大颗粒和杂质,提高药物的稳定性和安全性。滤膜的材质和型号将影响脂质纳米粒药物的过滤效率和效果,综合考虑膜与纳米药物配方的兼容性、成本、效率等多方面因素选择合适的滤膜。Entegris滤芯Entegris-Anow是一家高分子微孔膜过滤企业,专业从事MCE、Nylon、PES、PVDF、PTFE等(膜孔径为0.03μm~10μm)微孔膜的研发及生产,具有二十多年服务与医药客户经验,并为全 球生物制药、医疗器械、食品饮料、实验室分析、微电子及工业等领域的客户提供过滤、分离和净化解决方案。
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2023-02-17 13:16:01核酸脂质纳米粒科普——RNA-LNP包封率测定
自新冠mRNA疫苗成功上市以来,脂质纳米粒(Lipid nanoparticle,LNP)已成为mRNA、siRNA、pDNA等核酸的优先递送载体,广泛用于mRNA疫苗及治愈。微流控技术是目前制备核酸脂质纳米粒常用的技术,包封率则是评价其制备效果的重要指标之一,下面就为大家介绍使用RiboGreen测定RNA-LNP包封率的方法。1 RiboGreen检测RNA-LNP包封率的原理1.1RNA-LNP包封率(Encapsulationefficiency,EE):包裹在脂质纳米粒内部的RNA占RNA-LNP溶液中全部RNA的比例。1.2 RiboGreen检测RNA原理:RiboGreen是一种用于定量检测溶液中RNA含量的超敏感荧光核酸染料,当RiboGreen荧光染料处于溶液状态时,几乎没有荧光活性,与RNA结合时,其荧光活性将增加1000倍。RiboGreen-RNA复合物的荧光激发波长约500nm,发射波长约525nm,通过酶标仪,建立已知浓度RNA的标准曲线,即可得到样品RNA浓度。1.3 RiboGreen检测包封率原理:分别测定LNP-RNA溶液中游离RNA浓度,以及用Triton-100破坏LNP结构后,溶液中全部的RNA浓度,两者的差值就是包封在LNP内部的RNA浓度。通过以下公式即可计算得到包封率结果。图1核酸脂质纳米颗粒的示意图2操作要点2.1制备Buffer1X TE Buffer:使用试剂盒中20X TE Buffer稀释。2% Triton-TE buffer:使用Triton-100与1X TE buffer以体积比1:50配制。2.2添加RNA-LNP样品至全黑96孔板根据制备时RNA的量,可以大致计算需要稀释的倍数。例如,已知 mRNA的原始质量或浓度,使用铭汰MicroFlow S进行RNA-LNP合成,根据稀释、超滤等处理后的最终体积,即可估算大致总RNA浓度。同时,假设90%的包封率,即可估算游离RNA浓度。然后根据标曲的浓度计算需要稀释的大致倍数。这样我们就可以使用1X TE buffer将RNA-LNP稀释适合倍数以检测LNP外游离RNA浓度,使用2% Triton-TE buffer将RNA-LNP稀释适合倍数以检测总RNA浓度,建议每项检测至少两个不同稀释倍数。然后,分别移取100 μL稀释后的样本,添加到全黑96孔板。2.3标样添加一般直接使用试剂盒中100 μg/mL的RNA标样,也可以使用与待测样本类似的RNA标样来建立标准曲线。可以先用1X TE buffer将原始标样稀释到工作浓度4 μg/mL,然后参考表1的体积比,配制为一定浓度梯度的标样。分别移取各浓度的标样100 μL,添加到全黑96孔板中。注:*最终RNA浓度考虑了步骤2.4添加RiboGreen染料后的浓度当RNA-LNP样品及特定浓度的标样添加到96孔板后,需要在37℃下避光孵育10 min,以使RNA-LNP在Triton buffer中充分裂解。2.4 RiboGreen染料添加把试剂盒中RiboGreen试剂,使用1X TE Buffer按照1:100的比例稀释,例如需要2000 μL RiboGreen染料,可将20 μL的RiboGreen试剂添加到1980 μL的1X TE Buffer中。然后各取100 μL加入到已经加有样品的96孔板中,37℃下避光孵育5min。图2 样品添加2.5酶标仪检测打开酶标仪,选择荧光模式,激发光485nm,发射光528nm,读数,记录数据。 2.6数据处理及分析    将每个样本测得的荧光值减去空白荧光值,即可得到实际荧光值。根据标样的荧光值和浓度梯度,绘制标准曲线,得到回归方程。把样品荧光值代入回归方程,乘以稀释倍数,即可得到样本的RNA浓度。根据1.3中包封率公式计算得到包封率结果。图3 标准曲线3 小结准确的包封率测定对于评价RNA-LNP的包封效果至关重要,影响着后续细胞实验和动物实验的开展。RNA-LNP包封率测定一般使用商业化的试剂盒,虽然操作环节较多,但只要细心规范,操作起来也并不难,相信大家可以得到准确的实验结果。纳米药物制备系统应用范围:
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2021-12-30 13:28:29豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶ELISAkit
本生(天津)健康科技有限公供应:豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶ELISAkit,LPOELISA检测试剂盒【货号】BS-A3724【规格】96T/48T【产品名称】豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒免费代测【保存条件】2-8℃。 【有效期】6个月本生生物公司供应:ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器,分光光度计。豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶ELISAkit,LPOELISA检测试剂盒注:产品仅用于科研实验!兔6酮前列腺素F1aELISAkit,6-keto-PGF1aELISA检测试剂盒兔血管内皮细胞粘附分子1ELISAkit,VCAM-1/CD106ELISA检测试剂盒兔血纤蛋白原ELISAkit,FbgELISA检测试剂盒兔可溶性凋亡相关因子ELISAkit,sFAS/Apo-1ELISA检测试剂盒兔抑瘤素MELISAkit,OSMELISA检测试剂盒兔血管生成素2ELISAkit,ANG-2ELISA检测试剂盒兔血管紧张素ⅡELISAkit,ANG-ⅡELISA检测试剂盒兔子促黄体激素ELISAkit,LHELISA检测试剂盒兔p53ELISAkit,p53ELISA检测试剂盒牛传染性胸膜肺炎抗体ELISAkit,IFP-AbELISA检测试剂盒牛结核抗体ELISAkit,TB-AbELISA检测试剂盒牛轮状病毒ELISAkit,RVELISA检测试剂盒牛载脂蛋白A1ELISAkit,apo-A1ELISA检测试剂盒牛副结核抗体ELISAkit,PBS-abELISA检测试剂盒牛晚期糖基化终末产物ELISAkit,AGEsELISA检测试剂盒
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2022-11-21 12:04:41【PSS-TN-22027A】USP 729 脂质注射乳剂中的整体粒径分布
全文共2173字,阅读大约需要7分钟摘要:用于静脉注射的脂质注射乳剂是大豆油制的无菌水包油乳剂,检测脂质体注射乳剂的平均粒径大小以及尾端大颗粒分布对于人体健康显得十分关键。USP 729着重介绍了采用光散法及光阻法来检测脂质注射乳剂平均粒径以及尾端大颗粒分布的两种方法。奥法美嘉公司旗下的Nicomp Z3000以及Accusizer A7000 APS两款仪器很好的满足了USP 729的要求,为客户的检测提供了完整的解决方案。关键词:脂质注射乳剂、平均粒径、尾端大颗粒、Nicomp Z3000、Accusizer A7000 APS乳状注射液又称脂肪乳注射液,是水包油的分散体系, 外观呈半透明或不透明的乳状液体, 为热力学不稳定体系。其制备工艺一般采用高压均质法或微射流法, 无论采用哪种制备方法, 脂肪乳的粒径都无法得到完全均一的值, 存在一定粒径分布范围。通常, 在脂肪乳中,当油脂的密度低于周围水媒介密度约10%时, 乳析现象就会产生。乳析的乳剂只要轻轻搅拌, 乳滴仍能重新分布。但当脂滴合并成直径超过1μm的大脂滴时, 脂滴的合并便是不可逆的过程, 脂滴会逐渐聚集, 1μm脂滴可“生长”成 5μm甚至更大的脂滴颗粒, 直至自由脂滴从乳剂中析出,成为不稳定脂肪乳。1、工作原理USP 729中着重介绍了检测平均粒径大小的动态光散射法与检测尾端大颗粒的光阻法。检测平均粒径大小动态光散射(DLS)动态光散射(DLS),同样理解为与光子相关的光谱法(PCS)。DLS或者说PCS技术的基础是分析由于悬浮在液体中的任何粒子(包括乳粒)的随机布朗运动或扩散而引起的散射光强随时间的波动。光强由合适的检测器(例如光电倍增管)以给定的入射角度(通常为90度)测量,该检测器可以测量由悬浮颗粒运动导致的快速随机的散射光强度,测量得到的光强数据用来计算光强自相关管函数,利用斯托克-爱因斯坦方程计算样品粒径大小。经典光散射经典光散射,基于米氏散射理论。测量散射光角度来反映散射光强的变化,通常在大范围的检测角。检测尾端大颗粒光阻法单个粒子通过狭窄的光感区时阻挡了一部分入射光,引起到达检测器的入射光强度瞬间降低,强度信号的衰减幅度理论上与粒子横截面(假设横截面积小于光感区的宽度),即粒子直径的平方成比例。用系列标准粒子建立粒径与强度信号大小的校正曲线。仪器测得样品中乳粒通过光感区产生的信号,根据校正曲线计算出乳粒的粒径及加权体积。使用单粒子光学传感技术传感器时,需知道重合限与最 佳流速。2、相关仪器及标准在仪器标准化测试过程中规定了样品体积精度、样品流速、粒度响应曲线直径校准、传感器分辨率的各项要求。平均粒径(1) 仪器:采用动态光散射法的设备(可带自动稀释)如Nicomp Z3000(2) 水:将蒸馏水透过一个0.2μm的滤膜过滤,通过超声去除里面的气泡,或者用保存在玻璃容器中注射用的无菌水。(3) 标准粒子:可溯源的苯乙烯乳液标准粒子或其他合适的纳米球。100nm,250nm和400nm三种不同尺寸标准的粒子4) 样品稀释浓度:采用什么样的最 佳稀释方案以达到适当的散射强度为基础来分析是由仪器的规格决定的。因此,最 终样品中乳胶的浓度必须根据所使用的动态光散射设备决定。(5) 系统适应性通过标准:按照标准操作测量,得到样品光强径平均粒径以及相关标准偏差。该系统适用于当样品达到稳定温度后,结果稳定,并且平均三次测量平均粒径的结果。变异系数不能超过NIST-可追溯平均粒径的10%。尾端大颗粒(1)仪器:采用合适的具有或没有自动稀释的并且由计算机控制操作的光阻法仪器进行测量。如Accusizer A7000 APS(2)水:将蒸馏水透过一个0.2μm的滤膜过滤,通过超声去除里面的气泡,或者用保存在玻璃容器中注射用的无菌水。(3)标准粒子:可溯源的苯乙烯乳液标准粒子或其他合适的纳米球。光阻法仪器的粒径测量与计数准确性要通过两个不同的标准混合粒子5和10μm混标获得。(4)样品稀释浓度:不带有自动稀释的仪器需手动进行稀释。配备了自动稀释系统,浓缩的样品可以通过注射器或者特氟隆样品线直接进入仪器进行分析,然后自动稀释,优化液滴浓度进行分析。(5)系统适应性通过标准:设置仪器的阈值为1.8μm,上限延申至50μm. 重复三次测量标准粒子的粒径与每毫升数量。相关结果的平均粒径应该符合标粒的期望值,相对标准偏差在10%以内,粒径准确度在90%到110%以内。另外,粒子每毫升颗粒数应该与标准粒子浓度偏差在10%以内。(6)样品通过标准:将仪器的阈值设定为1.8μm,上限延申至50μm。在任何情况下,只要测量5μm粒径以上的粒子数足够多,它就代表了样品中由足够多的球状粒子,这些粒子在统计学上代表了原生乳液中的尾端大粒子。大于5μm的乳粒加权总体积占油相体积的百分比,其结果不得超过0.05%。3、Nicomp Z3000 & Accusizer A7000 APS奥法美嘉旗下的Nicomp Z3000 & Accusizer A7000 APS型号设备是典型的动态光散射法和光阻法原理的设备,采用Nicomp 、SPOS单颗粒光学传感技术,通过对样品的准确分析,集检测、数据处理及自动冲洗等功能一体,操作便捷、高效。Nicomp Z3000相比于其他厂家的DLS设备,在常用的高斯分布下,又用自己独特的Nicomp算法,可准确分辨出样品是否属于多峰,给客户提供准确的数据,满足客户的需求。Nicomp Z3000可以检测0.3nm-10μm的准确粒径分布。Accusizer A7000 APS采用SPOS单颗粒光学传感技术,通过对样品进行自动稀释,有效避免了人工操作导致的检测误差,集检测、数据处理及自动冲洗等功能一体,操作便捷、高效。使用Accusizer APS光学粒度分析仪测试5μm和10μm的混合标粒(批号:UH13A),结果如下图所示:参考资料USP 729脂质注射乳剂中球状大小分布
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2021-09-09 16:28:33核酸脂质纳米粒科普——后处理
在我们使用微流控或其他方法合成核酸脂质纳米粒后,成品溶液常常因有机溶剂的存在而不稳定。以常见的微流控水相、有机相合成比3:1为例,有机相溶剂常使用无水乙醇,在混合后仍然有高达25%的含量。高浓度的乙醇将逐渐破坏溶液中的纳米粒子,使其粒径逐渐增大。有的甚至能在短短数小时内由50 nm增长到200 nm,严重影响实验结果和方案评估,所以合理、及时的后处理尤为重要。通常而言,后处理等同于除溶剂,但一般也会对溶液中的纳米粒子进行粒径测定。 粒径测定通常使用动态光散射粒度仪,需要注意的是,不同品牌的粒度仪对于同一个样品的检测结果会有些许差别。另外,在检测过程中,需要注意待测液体的浓度和温度对结果造成的影响:一般而言,浓度过高的液体因散射光被大量粒子阻挡,所测出的粒径偏差较大;而温度决定了粒子布朗运动强度,溶液温度没有平衡前也会影响粒径的检测结果。 除溶剂则通常采用超滤或透析。超滤为主动式,速度快;透析为被动式,速度慢。有些科研工作者可能会担心超滤的方式过于猛烈,导致纳米粒子的破坏。对于这一点其实没有必要过于担心,一方面在超滤的过程中,并不会完全将溶剂去除——通常在剩1 – 2 mL时就停止离心;另一方面超滤相对于透析更快,虽有极少量的纳米粒子破坏,却避免了有机溶剂长期留存带来的影响,两害取其轻,超滤仍旧是除溶剂的有效办法。超滤管   测粒径和除溶剂的具体步骤如下: 1. 完成纳米粒子的合成后(假定成品1 mL),立刻用去钙去镁的D-PBS进行40倍稀释,体积为40 mL。稀释后取0.5 – 1 mL左右进行粒径测定,剩余39 – 39.5 mL执行剩余步骤以除溶剂。2. 将剩余溶液倒入超滤管中,室温(20℃)下以2000×g的速度离心5 – 30 min,离心时间依超滤管孔径大小而有所区别,第一次尝试时可以密切关注超滤管中的液体,以剩余1 – 2 mL为停止信号。3. 取出超滤管,将下方液体倒出,在超滤管上方继续添加剩余溶液(如果步骤2没有完全倒入超滤管中的话),并用移液枪吸取管中液体冲洗滤膜数次,按步骤2的参数再次超滤。4. 重复步骤2 – 3,直至溶液全部浓缩至1 mL左右。用移液枪吸取管中液体冲洗滤膜数次后将液体全部吸出转移并在生物安全柜中过0.2 μm滤膜除菌(如不进行生物实验则无需除菌)后,即为最终品。得到最终品后,就可根据使用者的实际需求稀释成相应浓度,并进行动物或细胞实验。 随着纳米技术的不断发展,纳米药物在医药领域的应用越来越广泛,尤其在疫苗的研发、基因治疗,肿瘤靶向等方面显现了不可替代的优势。锘海生物为科研工作者和企业提供全面的纳米药物制备、生产及检测服务,囊括了纳米药物研发过程中,从处方筛选到制剂表征的全线过程。为客户简化流程,节约时间成本,同时提供高质量的数据分析与技术支持服务。 纳米药物制备系统应用范围 了解更多纳米药物制备系统相关信息 请联系021-37827858 或 13818273779(微信同号) 点击以下链接,查看往期回顾 核酸脂质纳米粒(LNP)科普 —— 组成成分及作用核酸脂质纳米粒科普——氮磷比计算通过微流控技术高效、可放大的制备核酸脂质纳米粒mRNA-LNP的结构到底是怎样的?大小、结构不同的mRNA-LNP,细胞内的蛋白表达会不同吗?—— 粒径大小篇mRNA体内递送载体有哪些?NanoAssemblr制备的LNP实现对CRISPR-Cas9的高效递送
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