免疫荧光染色 - 产品信息 - 相关知识

2025-01-10 10:53:05免疫荧光染色: 免疫荧光染色是一种生物学实验技术，利用荧光标记的抗体检测组织或细胞中的特定蛋白质。其基本原理是将荧光染料与抗体结合，使其能够特异性地与目标蛋白质结合，并在激发光下发出荧光，从而实现对目标蛋白质的定位和可视化。这项技术在生物医学研究、疾病诊断及药物研发等领域有广泛应用，通常需要使用荧光显微镜等科学仪器进行观察和分析。

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免疫荧光染色问答

2022-10-17 16:08:19ibidi:免疫荧光染色故障排除指南: 　　01、故障排除　　免疫荧光染色是一种非常敏感的方法，需要大量的经验和不断优化。方案中微小的变化可以显着改变结果。如果遇到低信号、无信号或高背景，请参阅以下故障排除指南：　　高背景：　　02、ibidi解决方案　　用于倒置显微镜的具有盖玻片底部的ibidi μ-Slides腔室载玻片和μ-Dishes培养皿有多种几何形状可供选择，可满足您对免疫细胞化学的任何特定需求。所有免疫荧光染色步骤都可以直接在载玻片或培养皿中进行。　　ibidi通道载玻片的几何形状非常适合精确交换少量的培养基，这在免疫细胞化学染色过程中是必要的。此外，通道µ-Slides的盖玻片底部无需额外的盖玻片。　　在ibidi腔室载玻片中，带有可移除的硅胶培养小室安装在标准玻璃盖玻片上，非常适合长时间样品保存。　　03、低信号或无信号

2018-12-12 01:25:44免疫荧光染色能进行细胞平均荧光强度分析吗:

2018-12-11 18:00:38有站友用image J分析过小胶质细胞的免疫荧光染色吗:

2025-05-08 14:30:20共聚焦显微镜怎么染色: 共聚焦显微镜怎么染色在生物医学和细胞研究领域，共聚焦显微镜（Confocal Microscopy）已成为研究细胞结构、组织成分及其动态变化的有力工具。染色作为共聚焦显微镜成像过程中不可或缺的一部分，不仅能够提高图像的对比度，还能在空间和时间尺度上揭示样本的细节信息。本文将讨论如何正确选择和应用染色方法，以优化共聚焦显微镜的成像效果，并探讨不同染色方法的优缺点及其适用范围。无论是活细胞成像还是固定组织的观察，染色技术的选择对实验结果的准确性和可重复性至关重要。 1. 共聚焦显微镜染色的重要性在共聚焦显微镜成像中，染色的目的主要是为了增加特定细胞或组织结构的可视性。与传统的荧光显微镜相比，共聚焦显微镜可以提供更高的空间分辨率和更清晰的图像，特别是在对多层组织样本进行成像时。染色剂通常选择具有特定荧光特性的化合物，这些染料能够与目标分子发生结合并发射出可被显微镜探测的光信号。因此，染色不仅能显著增强图像质量，还能帮助研究人员准确识别不同细胞类型、亚细胞结构以及分子动态。 2. 选择合适的染色剂染色剂的选择直接影响共聚焦显微镜的成像效果。常见的染色方法包括荧光染色和免疫荧光染色。荧光染料如DAPI、Hoechst等可用于染色DNA，而免疫荧光染色则依赖于抗体与目标分子的特异性结合，通过荧光标记实现分子的可视化。对于多重染色实验，需要选择不同发射波长的染料，确保它们在共聚焦显微镜下可以分开检测。常见的多重染色方案包括结合Alexa Fluor、FITC、Cy3、Cy5等荧光标记物的应用，这些染料具有不同的激发和发射光谱，可实现多种目标的同时检测。 3. 染色技术的实施染色过程的实施必须细致而，以避免影响图像质量或实验结果。细胞或组织样本的制备至关重要。对于活细胞，染色剂的浓度和染色时间需要经过优化，以防止过量染料对细胞功能的损害。对于固定样本，必须选择适当的固定剂，如甲醛或冰醋酸，以保持细胞或组织的结构完整性。在染色过程中，样本的处理步骤也应遵循严格的时间和温度要求，以确保染料均匀地分布并与目标分子结合。 4. 染色后的图像采集与分析染色后的图像采集需要使用共聚焦显微镜的精细调焦和成像设置。为了获得高质量的图像，建议使用较低的激光功率和较小的光斑尺寸，以避免样本光漂白或光毒性。成像时还需注意光路设置的优化，确保每个荧光信号的分离和对比度的提高。图像采集后，可以通过专门的软件进行后期分析，进一步提取感兴趣的生物学信息。 5. 注意事项与挑战尽管共聚焦显微镜在染色成像方面具有巨大的优势，但染色过程仍面临一些挑战。过量的染色剂可能导致背景噪声增加或影响样本的自然状态，因此，染色剂的选择和浓度需要精确控制。染色后的样本必须迅速处理，以防止染料的衰减或样本的降解。掌握共聚焦显微镜染色技术是科研人员在细胞和分子层面深入理解生物过程的关键。通过科学合理地选择染色剂和染色方法，以及细致的实验操作，可以极大提升成像效果，确保实验数据的准确性和可靠性。

2022-11-23 10:51:20免疫荧光显微成像详解（上）——免疫荧光原理、步骤: 前言免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，它是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。直接法将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。间接法如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于任何抗原的诊断。一、实验步骤免疫荧光实验的主要步骤包括样片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育、封片及荧光检测等。1、样品准备对于单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过（70%乙醇中浸泡）的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片即可，操作过程要小心，防止细胞脱片。对于悬浮生长细胞，有两种方式，一种是取对数生长细胞，制备细胞片或直接制备细胞涂片，把细胞片浸入封闭液中固定，封闭后滴加一抗和二抗孵育；另一种是先在悬浮液中进行固定和染色，离心洗脱后，用移液管移至盒式玻片进行后续抗体孵育。对于冰冻切片制备，建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。组织一定要冷冻适度，切片时选用干净锋利的刀片，防止裂片和脱片。对于石蜡切片的制备，要先进行脱蜡和抗原修复的处理。2、固定做好切片并风干后立即用合适的固定液（固定液包括有机溶剂和交联剂，其选择取决于抗原的性质及所用抗体的特性）进行固定，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。固定时间则取决于固定组织切片的大小和类型，对大多数组织，18-24h即可，而细胞的固定时间较短。3、通透针对胞内抗原，使用0.5% Triton X-100或丙酮等通透剂进行通透，这一步的目的是使抗体进入胞内。4、封闭为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用封闭液（一般包括与二抗同一来源的血清、BSA或者羊血清）封闭，减弱背景着色。封闭开始后，要注意样品的保湿，避免样品干燥，否则极易产生较高的背景。5、一抗孵育一抗孵育温度一般分为：4℃、室温、37℃，其中4℃效果更佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37℃孵育1-2h，4℃过夜（从冰箱拿出后37℃复温45min）。具体条件还要根据样品、稀释液等条件进行摸索尝试。6、荧光二抗孵育荧光二抗孵育一般在室温或37℃孵育30min-1h，该过程必须在避光环境下进行，防止荧光淬灭。荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能会有大量的游离荧光素残留，需要注意配制时采用小包装并进行适当的离心。7、复染一般采用DAPI进行复染，目的是形成细胞轮廓，从而对目标蛋白进行定位。8、封片为了长期保存，我们需要对样本进行封片，用吸水纸吸干爬片上的液体，一般用缓冲甘油等或专门的抗荧光淬灭的封片液。9、荧光观察有条件的话立即用荧光显微镜观察拍照，若不能及时拍照，也要做好封片和封固，保持避光和湿度。荧光显微镜的成像能力对最终的结果也会造成很大的影响，好的荧光显微镜能够最大限度地收集荧光信号，并呈现高分辨率的图片，使细节更清楚，更易得到一张效果极佳的结果图。注意：切片清洗：为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗(延长时间和增多次数)尤为重要，一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。(1)单独冲洗，防止交叉反应造成污染；(2)温柔冲洗，防止切片的脱落。可使用浸洗方式；(3)冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质；(4)PBS的PH和离子强度的使用和要求（建议PH在7.4-7.6，浓度是0.01M；中性及弱碱性条件有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）。根据上述步骤完成免疫荧光实验后，就需要进行荧光显微成像，得到我们想要的结果。选择一款操作简单、成像清晰、效果卓越的荧光显微镜进行观察拍照，才能轻松得到更为理想的结果图，达到事半功倍的效果。Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜作为一款电动化、智能化的显微镜，具有以下优势：☑ 正倒置一体快速切换：切片、细胞观察随心切换，无惧任何耗材；☑ DHR数字降噪功能：极大地降低了背景噪音和荧光干扰，提高图像锐度，加深细节，得到分辨率更高的图片；☑ 强大的Z-Stacking功能：通过高精度电动化Z轴层扫来扩大景深，解决厚样本观察问题，提高图像分辨率；☑ 500MP单色相机：能够采集更多荧光信号，助力低荧光强度样本观察；☑ 多通道荧光自动拍摄叠加功能：可自动进行多通道成像的叠加，个性化选择查看/保存各通道的组合图像。