免疫荧光标记 - 产品信息 - 相关知识

2025-01-10 10:53:05免疫荧光标记: 免疫荧光标记是一种利用荧光物质标记抗体或抗原的检测技术。该技术通过特异性抗原抗体反应，使荧光物质与目标分子结合，然后在显微镜下观察荧光信号，从而实现对特定蛋白质、细胞或组织的检测和分析。免疫荧光标记具有高灵敏度、高分辨率等特点，广泛应用于生物医学研究、临床诊断等领域，为疾病的诊断、治疗和预防提供了重要手段。

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2022-11-23 10:51:20免疫荧光显微成像详解（上）——免疫荧光原理、步骤: 前言免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，它是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。直接法将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。间接法如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于任何抗原的诊断。一、实验步骤免疫荧光实验的主要步骤包括样片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育、封片及荧光检测等。1、样品准备对于单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过（70%乙醇中浸泡）的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片即可，操作过程要小心，防止细胞脱片。对于悬浮生长细胞，有两种方式，一种是取对数生长细胞，制备细胞片或直接制备细胞涂片，把细胞片浸入封闭液中固定，封闭后滴加一抗和二抗孵育；另一种是先在悬浮液中进行固定和染色，离心洗脱后，用移液管移至盒式玻片进行后续抗体孵育。对于冰冻切片制备，建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。组织一定要冷冻适度，切片时选用干净锋利的刀片，防止裂片和脱片。对于石蜡切片的制备，要先进行脱蜡和抗原修复的处理。2、固定做好切片并风干后立即用合适的固定液（固定液包括有机溶剂和交联剂，其选择取决于抗原的性质及所用抗体的特性）进行固定，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。固定时间则取决于固定组织切片的大小和类型，对大多数组织，18-24h即可，而细胞的固定时间较短。3、通透针对胞内抗原，使用0.5% Triton X-100或丙酮等通透剂进行通透，这一步的目的是使抗体进入胞内。4、封闭为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用封闭液（一般包括与二抗同一来源的血清、BSA或者羊血清）封闭，减弱背景着色。封闭开始后，要注意样品的保湿，避免样品干燥，否则极易产生较高的背景。5、一抗孵育一抗孵育温度一般分为：4℃、室温、37℃，其中4℃效果更佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37℃孵育1-2h，4℃过夜（从冰箱拿出后37℃复温45min）。具体条件还要根据样品、稀释液等条件进行摸索尝试。6、荧光二抗孵育荧光二抗孵育一般在室温或37℃孵育30min-1h，该过程必须在避光环境下进行，防止荧光淬灭。荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能会有大量的游离荧光素残留，需要注意配制时采用小包装并进行适当的离心。7、复染一般采用DAPI进行复染，目的是形成细胞轮廓，从而对目标蛋白进行定位。8、封片为了长期保存，我们需要对样本进行封片，用吸水纸吸干爬片上的液体，一般用缓冲甘油等或专门的抗荧光淬灭的封片液。9、荧光观察有条件的话立即用荧光显微镜观察拍照，若不能及时拍照，也要做好封片和封固，保持避光和湿度。荧光显微镜的成像能力对最终的结果也会造成很大的影响，好的荧光显微镜能够最大限度地收集荧光信号，并呈现高分辨率的图片，使细节更清楚，更易得到一张效果极佳的结果图。注意：切片清洗：为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗(延长时间和增多次数)尤为重要，一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。(1)单独冲洗，防止交叉反应造成污染；(2)温柔冲洗，防止切片的脱落。可使用浸洗方式；(3)冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质；(4)PBS的PH和离子强度的使用和要求（建议PH在7.4-7.6，浓度是0.01M；中性及弱碱性条件有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）。根据上述步骤完成免疫荧光实验后，就需要进行荧光显微成像，得到我们想要的结果。选择一款操作简单、成像清晰、效果卓越的荧光显微镜进行观察拍照，才能轻松得到更为理想的结果图，达到事半功倍的效果。Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜作为一款电动化、智能化的显微镜，具有以下优势：☑ 正倒置一体快速切换：切片、细胞观察随心切换，无惧任何耗材；☑ DHR数字降噪功能：极大地降低了背景噪音和荧光干扰，提高图像锐度，加深细节，得到分辨率更高的图片；☑ 强大的Z-Stacking功能：通过高精度电动化Z轴层扫来扩大景深，解决厚样本观察问题，提高图像分辨率；☑ 500MP单色相机：能够采集更多荧光信号，助力低荧光强度样本观察；☑ 多通道荧光自动拍摄叠加功能：可自动进行多通道成像的叠加，个性化选择查看/保存各通道的组合图像。

2023-08-10 09:32:25倒置荧光显微镜下的免疫荧光细胞: 倒置荧光显微镜下的免疫荧光细胞：探索微观世界的奥秘显微镜观察免疫荧光细胞是一种重要的实验方法，用于研究细胞内蛋白质、核酸等成分的表达、功能和相互作用，目前，免疫荧光显微镜已经成为生物学研究中不可或缺的工具之一。在倒置荧光显微镜观察细胞时，需要选择合适的显微镜参数，以确保观察的准确性和稳定性。例如，光源的种类、显微镜的分辨率、物镜放大倍数和荧光通过率等因素。此外，在进行免疫荧光显微镜观察细胞时，需要选择合适的荧光强度和荧光颜色，以避免对观察结果的干扰。倒置荧光显微镜MF52-N采用无限远光学设计和数显LED荧光模块，光路经过深度优化，能提供简单易用的荧光激发和高质量的相衬、荧光和明场成像，可选双光路、一体供电、人走灯灭，广泛用于细胞培养、生物制药、医疗检测等领域。免责声明本站无法鉴别所上传图片、字体或文字内容的版权，如无意中侵犯了哪个权利人的知识产权，请来信或来电告之，本站将立即予以删除，谢谢。来源：https://www.mshot.com/article/1810.html

2023-08-01 15:38:08免疫荧光细胞用什么显微镜观察？: 倒置荧光显微镜下的免疫荧光细胞：探索微观世界的奥秘显微镜观察免疫荧光细胞是一种重要的实验方法，用于研究细胞内蛋白质、核酸等成分的表达、功能和相互作用，目前，免疫荧光显微镜已经成为生物学研究中不可或缺的工具之一。在倒置荧光显微镜观察细胞时，需要选择合适的显微镜参数，以确保观察的准确性和稳定性。例如，光源的种类、显微镜的分辨率、物镜放大倍数和荧光通过率等因素。此外，在进行免疫荧光显微镜观察细胞时，需要选择合适的荧光强度和荧光颜色，以避免对观察结果的干扰。倒置荧光显微镜MF52-N采用无限远光学设计和数显LED荧光模块，光路经过深度优化，能提供简单易用的荧光激发和高质量的相衬、荧光和明场成像，可选双光路、一体供电、人走灯灭，广泛用于细胞培养、生物制药、医疗检测等领域。免责声明本站无法鉴别所上传图片、字体或文字内容的版权，如无意中侵犯了哪个权利人的知识产权，请来信或来电告之，本站将立即予以删除，谢谢。来源：https://www.mshot.com/article/1810.html

2022-12-15 16:35:43ibidi应用指南|免疫荧光实验: 　　免疫荧光实验原理　　　　免疫荧光(IF)是使用显微镜深入了解细胞结构和过程的有效方法。此方法可评估特定蛋白质的表达和位置，使得免疫荧光成为科学家解决许多细胞生物学问题不可或缺的工具。　　　　免疫荧光实验基于以下主要步骤：　　　　1.特异性抗体与感兴趣的蛋白质结合。　　　　2.荧光染料与这些免疫复合物偶联，以便使用显微镜观察感兴趣的蛋白质。　　　　　　内皮细胞中vWF的免疫荧光染色。肌动蛋白用phalloidin染色(绿色)，细胞核用DAPI染色(蓝色)。　　　　区分直接和间接免疫荧光。在直接免疫荧光中，一抗直接偶联到荧光团（也称为荧光色素），便于处理和快速可视化。在间接免疫荧光中，使用特异性结合一抗的二级荧光团偶联抗体来可视化感兴趣的结。　　　　尽管di二种方法比直接免疫荧光更耗时，但它有几个显著的优势，比如它通常更便宜，因为二抗可以用于不同的一抗。此外，通过结合多个一抗和特定的二抗(每个抗体都用不同的荧光团标记)，可以在单个样品中平行特异地显示多个蛋白质(多色免疫荧光)。　　　　　　免疫荧光染色:典型的工作流程　　　　每个免疫荧光染色方案由培养、固定、染色、成像四个主要步骤组成，可细分如下:　　　　　　免疫荧光染色是一种非常敏感的方法，可能需要排除故障《免疫英冠染色故障排除指南》。方案中的微小变化可能会导致不同的结果，而这些结果不再具有可比性。因此，在您的特定方案中精确地保持完全相同的条件是非常重要的(例如，细胞密度、抗体稀释度、培养温度和培养时间)。　　　　　　免疫荧光实验方案对比　　　　传统染色与ibidi方案染色　　　　当使用任何ibidi解决方案时，ibidi的免疫荧光染色方案比传统方案要简便快速的多。无需在松散的盖玻片上生长细胞，细胞可直接在ibidi玻片上生长和染色。　　　　　　　　用于免疫荧光应用的各种ibidi产品　　　　　　更多ibidi相关产品的免疫荧光实验应用可查阅我们雷萌公众号相关文章！　　　　参考文献　　　　K.G. Zyner, A. Simeone, S.M. Flynn, et al. G-quadruplex DNA structures in human stem cells and differentiation. Nat Commun, 2022, 10.1038/s41467-021-27719-1　　　　C. Xu, et al. NPTX2 promotes colorectal cancer growth and liver metastasis by the activation of the canonical Wnt/beta-catenin pathway via FZD6. Cell Death & Disease, 2019, 10.1038/s41419-019-1467-7　　　　Kobayashi, T., et al. Principles of early human development and germ cell program from conserved model systems. Nature, 2017, 10.1038/nature22812　　　　H. Tada et al. Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells. PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794　　　　Read article

2023-01-13 23:27:08明美倒置荧光显微镜应用于免疫荧光观察: 明美倒置荧光显微镜应用于免疫荧光观察免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。利用荧光显微镜可以看见荧光标记的细胞器、细菌或病毒等目标,从而确定目标的有无和分布，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。此次，广西区域客户需要一套倒置荧光显微镜，主要看细胞、免疫荧光观察，用于做靶向药理，同时需要能在电脑成像，拍照保存与分析。明美广西区域负责人推荐了倒置荧光显微镜MF52-N,搭配2000万像素显微镜相机MDX10，呈现效果获得客户认可。倒置荧光显微镜MF52-N, 人体工学设计，观察操作省心；可实现明场、荧光、相差观察；载物台可匹配主流规格培养容器，也可拆下移动平台节省空间，满足用户切片或培养瓶、培养皿等多种样品观察倒置荧光显微镜MF52-N既可应用于细胞组织，透明液态组织的显微观察，也可用于生物制药、医学检测、疾病预防等领域内的荧光显微观察。免责声明本站无法鉴别所上传图片、字体或文字内容的版权，如无意中侵犯了哪个权利人的知识产权，请来信或来电告之，本站将立即予以删除，谢谢。来源：明美倒置荧光显微镜应用于免疫荧光观察 (mshot.com)

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