- 2025-01-21 09:34:37多色流式检测
- 多色流式检测能同时检测多个荧光标记物。通过不同荧光染料标记细胞内分子,利用流式细胞仪快速分析细胞,实现多参数、多色分析。广泛应用于生物医学研究、临床诊断等领域,用于细胞亚群识别、功能分析等。该技术对深入理解细胞生物学、提升临床诊断准确性具有重要意义。
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- 通过本次培训希望老师们更深入了解CytoFLEX流式细胞仪使用功能,使实验顺利进行。
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多色流式检测问答
- 2022-12-30 11:24:37MICA实现Caspase 3/7多色检测
- Caspases与细胞凋亡过程相关,因此可以利用caspase检测来确定细胞是否正在经历这种程序化的细胞死亡。这些检测可以通过例如流式细胞仪、平板读数仪实现,也可以在显微镜上完成,显微镜可为量化数据补充可见的结构信息。在这篇文章中,我们描述了MICA是如何用于caspase 3/7测定。借助Navigator或像素分类器等工具,MICA让设置、执行和分析caspase 3/7检测变得更加容易,即使没有经验的用户也可轻松操作。图像:双色caspase检测并进行拼接扫描。U2OS细胞用核标记物DRAQ5(品红)和CellEvent™(黄色)标记。加入4mM星形孢菌素以诱导细胞凋亡。20倍物镜下使用双通道荧光,持续16小时每30分钟获取一次2x2 FOV(视野范围)的扫描拼接图像。 引 言 凋亡细胞检测或者活细胞/死细胞检测一般通过将某种物质应用于活细胞并观察细胞反应,以此检测其毒性或有效性。死亡率随时间推移而上升或者剂量依赖性上升均证明物质有效。判断潜在药物的抗 癌效果便是一个典型示例。商用染料试剂盒可检测处于凋亡状态的细胞。这些试剂盒内染料为荧光染料,能够分别标记活细胞和死亡细胞。Caspase活性检测法是细胞凋亡检测法的一种。Caspase(半胱天冬酶)是参与细胞凋亡过程的一类半胱氨酸蛋白水解酶。它们还用于区分caspase介导的细胞凋亡或细胞坏死。这里的染料试剂盒使用的是DNA结合试剂,该试剂的荧光能够被四氨基酸肽(DEVD)阻断。一旦caspase-3和caspase-7(caspase-3/7)被激活,即当细胞处于凋亡状态时,caspase-3和caspase-7便会切割DEVD肽,然后DNA结合试剂便会开始呈现荧光。挑 战 由于添加剂浓度不同、孵育时间不同、染色类型或者细胞系等参数的不同,实验通常在多孔板上进行。这种方法有两个优点,一是能够在一个反应容器中设置多个不同的试验条件,二是只需要极少量的试剂和极低数量的细胞。但是,在实施过程中,用户仍然可能会被不同孔和不同实验的数量混淆。设置多孔板实验时,MICA自带的Navigator工具能够帮助预览。包括可以在虚拟画板上计划并设置每一孔的扫描拼接实验或者延时实验(见图1)。图1:导航工具。Navigator能提供整个样品载体的预览(例如,玻片、培养皿、孔板),并帮助用户设置实验。用户能够在整个孔板上操作导航并进入单孔内,比如界定感兴趣区域或者设计扫描拼接。追踪细胞活动需要使单一荧光通道的时空相关性成像。传统的宽场显微镜一般一次记录一个通道,因此每一个细胞结构只能按顺序、一个接一个地记录下来。这意味着两个不同的结构记录于两个不同的时间点。这对于极速发生的细胞事件来说可能会产生影响,特别是在共定位研究中。同时成像通过在同一时间记录全部荧光的方法规避了这一缺点。对于caspase活性检测法而言,这意味着用户能够观察到,例如在caspase-3/7被激活的瞬间线粒体的反应。MICA能够同时检测四种荧光,使用户可以同时观察到除细胞核、caspase-3/7活性、线粒体等之外的另一个细胞结构(见图5)。最 后,如果想要确定某一特定试剂在诱导caspase介导细胞凋亡时的效果,则需要对caspase检测进行量化。这种量化需要通过专门的外部软件来实现。MICA自带分析解决方案,不需要另外的软件。通过MICA自带的像素分类器,用户能够标记一些感兴趣区域(ROI),人工智能算法可以训练和识别这些区域(见图2)。对于caspase活性检测法而言,细胞核信号可用于确定细胞总数。CellEvent™信号可用于识别caspase介导的凋亡细胞。图2:利用像素分类工具训练MICA识别图像中样品特征。通过在图像中标记示例特征,像素分类器能够训练和划分所有目标物。 方 法 在这一案例研究中, U2OS细胞或者COS7细胞被铺在96孔板,然后培养一整晚的时间。在实验过程中,活细胞分别用DRAQ5、SPY-650-DNA以及TMRE孵育15分钟。之后,更换培养基,在实验结束前使用CellEvent™孵育细胞。每孔内加入凋亡诱导剂星形孢菌素(3 µM–7 µM)。在四色caspase活性检测法中,U2OS细胞被接种在96孔板上并在夜间生长,然后培养一整晚的时间。在实验过程中,活细胞与DAPI和TMRE孵育45分钟。之后,更换培养基,在实验结束前使用CellEvent™和SiR-Tubulin孵育细胞。每孔内加入凋亡诱导剂—星形孢菌素(3 µM–7 µM)。在37℃、5% CO2和~65%湿度的环境中,按照指示的时间间隔和持续时间用MICA进行活细胞成像。使用Navigator工具设定并执行检测。一些实验中会运行扫描拼接(参见视频2)。进行扫描拼接时,研究人员使用的主要策略是“focus Map”;此外,延时实验通过“Keep focus”来保持细胞的聚焦。使用MICA自带的分析功能进行本次实验中的数据分析。其中核心组件之一便是人工智能驱动的像素分类器,该功能位于“Learn”选项。通过像素分类器,用户能够标记其感兴趣区域(ROI),该区域将作为所有要检测的其他区域的示例。如图5所示,细胞核被像素分类器标记并检测。像素分类器同样能够标记并检测线粒体活性标识TMRE和caspase呈阳性的细胞。之后会在整个延时摄影过程中分析这批图像。经过计算之后,MICA会将计算结果以散点图、共定位图、直方图、饼状图、框图或者时间序列图的形式展示在“结果”选项中。图3:在分析过程中,MICA会标记作为样例的感兴趣区域,为人工智能驱动的分析功能提供信息。在此检测法中,细胞核(品红)和caspase阳性细胞(绿色)会被用于训练像素分类器,通过这种方式,像素处理器便有能力分析caspase介导的凋亡细胞比例。 结 果 SPY-650-DNA(标记细胞核)和CellEvent™(标记caspase 3/7活性)两种细胞染料的量化研究揭示了在活细胞实验中发生caspase介导的凋亡细胞。细胞核的数量说明了每张图像中细胞的数量,可与处于凋亡过程中细胞的数量相对应。另一个标记,即TMRE成像过程,揭示了线粒体活性。量化数据(如长度、宽度、面积)显示在采集图像下方的表格中,这些数据可被导出为Excel表格。获取的图像可以在延时成像的每一个时间点上查看,并可以与识别的ROI重叠。三色caspase 3/7活性检测图(图4)显示,细胞核信号在开始的时候增强,之后逐渐减弱。信号增强是因为核染色剂必须与DNA结合,这一结合过程需要一定的时间。另一方面,SPY-650-DNA信号减弱是因为细胞核解体,解体现象见相关图像。其他信号要么随时间增加而增强(CellEvent™),要么随时间增加而减弱(TMRE):caspase介导的凋亡细胞数量增加的同时激活状态的线粒体数量减少。图4:三色caspase 3/7活性检测法量化研究。通过像素分类器检测细胞核、TMRE和caspase阳性细胞,以确定在不同浓度的星形孢菌素下,随着时间的推移发生caspase介导的凋亡的细胞数量。TMRE信号能反映线粒体的健康状态。结果可以多种形式展示,比如时间序列图。用户可以通过MICA一次性对四种荧光成像。在caspase 3/7活性检测法中,这有助于调查凋亡过程中额外的细胞成分的命运—实现100%时空相关性。图5中展示的案例显示,除了细胞核(DAPI)、激活状态的线粒体(TMRE)以及caspase阳性细胞(CellEvent™)以外,也对肌动蛋白细胞骨架(SiR-Actin)进行了染色。高倍率下(63x),用户能够看到,caspase被激活之后,肌动蛋白细胞骨架坍塌。与此同时细胞核以及线粒体停止工作。因为所有通道都是在一次拍摄中获得的,各细胞活动成像之间存在精确联系。图5:四色caspase-3/7检测,用SiR-Actin、TMRE(线粒体活性)、CellEvent™(caspase活性)以及DAPI(细胞核)标记U2OS细胞。在时间点0加入星形孢菌素。在63x高倍、宽场模式以及THUNDER(ICC)成像模式下获得的图像。结 论Caspase活性检测法为研究抗 癌药物提供了新的见解。为了实现这一目标,研究人员必须在保证高时空精 准度的情况下将活细胞从凋亡细胞中区分出来。对于统计上可靠的结果,增加量很有必要。这就是为什么这类实验必须在孔板上进行,也必须进行量化研究。MICA满足以上全部要求。在FluoSync的帮助下,MICA可同时保证多达4种不同的荧光染料可以同时成像,不论是在单一培养皿上,还是在96孔板上。MICA完整的培养系统能够培育活细胞数日,同时其自带的基于人工智能的分析功能也有助于用户获得可靠的数据。参考:FluoSync - a Fast & Gentle Method for Unmixing Multicolour Images, Science Lab, Leica Microsystems (leica-microsystems.com)
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- 2025-01-06 18:15:12电涡流式测厚仪怎么校正
- 电涡流式测厚仪怎么校正 电涡流式测厚仪是一种常用的无损检测工具,广泛应用于材料的厚度测量中,尤其是在金属、涂层以及其他非磁性材料的测量中。为了保证测量结果的准确性和可靠性,定期的校正是非常必要的。本文将详细介绍电涡流式测厚仪的校正方法、步骤以及需要注意的关键点,帮助用户正确操作和维护仪器,确保测量精度,减少测量误差。 电涡流式测厚仪的原理 电涡流式测厚仪基于电涡流原理,利用高频电流在导电材料中产生的电涡流效应,通过测量涡流的变化来判断材料的厚度。该方法对待测物体表面无损伤,且对非磁性材料(如铝、铜、塑料涂层等)的测量具有较高的精度。由于电涡流的测量结果受多种因素的影响,如材料表面状况、温度变化等,因此仪器需要定期校正,以保证其准确性。 电涡流式测厚仪校正的必要性 校正是确保测厚仪准确性和可靠性的关键步骤。由于电涡流测量受多种变量影响,如测量环境、材料特性以及探头与被测物表面的接触情况等,若不定期校正,可能会导致读数偏差,从而影响测量结果的可信度。因此,通过标准校正件或校正板来进行校正,是确保仪器准确测量的必要环节。 电涡流式测厚仪的校正方法 选择校正标准件 校正时,首先需要选择与被测材料相同或相似的标准件。校正件的材质、厚度以及表面状态应与实际测量环境相符。一般来说,可以使用已知厚度的金属块、涂层样本或具有已知厚度的标准片。 调整仪器设置 在开始校正前,确保测厚仪的电池电量充足,仪器的设置参数(如频率、测量模式等)应根据校正件的特性进行适当调整。有些测厚仪提供自动校正功能,用户可通过选择合适的预设模式来完成校正。 校正步骤 将标准校正件平稳地放置在仪器的探头下,确保探头与表面接触良好且垂直。按照仪器说明书上的校正流程进行操作。一般来说,测厚仪会要求用户对比标准件的厚度与仪器显示的值,根据显示结果调整仪器的读数,直到读数与标准件的实际厚度一致。 多点校正 为确保高精度测量,建议在多个不同位置进行校正,尤其是当被测物表面存在不规则时,多个测量点能帮助提升校正的准确性。校正时,检查不同位置的读数是否一致,如果发现较大偏差,可能需要检查仪器是否存在故障或探头是否损坏。 记录和验证 完成校正后,建议记录下校正数据,并定期检查仪器的状态。对于重要测量任务,好进行一次验证测量,确保校正结果的有效性。校正后,应进行一段时间的实际测量验证,以保证测厚仪始终保持佳性能。 电涡流式测厚仪校正时的注意事项 环境因素 测量环境的温度、湿度、振动等都会影响校正结果。因此,校正时应尽量在稳定的环境中进行,避免环境波动影响仪器的性能。 标准件的选择 选择标准件时,要确保其厚度精度和表面平整度符合校正要求。任何微小的偏差都会影响到终的校正效果。 仪器维护 定期检查电涡流式测厚仪的探头、显示屏和接口等部件,保持仪器清洁,避免灰尘或腐蚀物影响测量精度。 定期校正 即便测量仪器的误差不明显,定期校正也是确保长期准确性的必要措施。推荐至少每半年进行一次全面的校正,尤其是在频繁使用的情况下。 结论 电涡流式测厚仪的校正不仅是保证其测量精度的关键,也是确保仪器长期稳定运行的基础。通过定期校正、选择合适的校正标准件、调整合适的仪器设置,并关注环境因素的变化,可以大大减少误差,确保测量结果的可靠性。在进行电涡流式测厚仪校正时,务必严格按照标准操作流程进行,保障测量的高效性与准确性。
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- 2022-12-01 20:08:12流式高手来PK | 流式分选小技巧投票评选
- 为期10天的流式分选小技巧征集已经结束啦,大家对流式分选都有很多心得哦。经过5位贝克曼应用和市场专家的评选,有11位小伙伴的作品入围本轮大众投票。让我们先来“康康”其中两个吧~小技巧1:对于单克隆的孔板分选,可以适当稀释样本。放慢进样流速。得到活率更好的单细胞。对于细胞团块:在样本里加入适当的EDTA和DNAase来防止。对于极脆弱的细胞分选:可以让仪器运行时的进样压差控制在0.5以内。小技巧2:在细胞制备、培养阶段,如果该培养细胞是贴壁细胞,需用先用胰酶消化细胞,然后收集待测样品细胞,离心、洗涤、封闭后标记荧光素偶联抗体即可。还有很多非常实用的小技巧如果你也喜欢,就去扫码为他点个赞吧!我们将根据点赞票数评选:一等奖:Apple AirPods Por降噪耳机二等奖:西部数据移动硬盘三等奖:机械键盘*其他入围作品也可以获得入围奖:超声波眼镜清洗机没有入围的小伙伴不要灰心,我们还有早鸟奖放送哦~投票时间2022年12月1日-12月7日扫描上方二维码快来你最心怡的3个小技巧点赞投票吧!*投票结束10个工作日会邮寄奖品,请大家关注哦!
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- 2022-11-22 20:20:26流式高手来PK | 流式分选小技巧有奖征集
- 你有没有被这些问题困惑:什么方法可以提高分选的细胞得率?分选样本制备的时候怎样避免团块?液流如何才能保持稳定?……遇到这些问题你又是怎样用聪明的小脑袋解决的呢?比如当我们发现分选细胞死亡率高,可以通过调整collecting buffer改善。以293T细胞为例,collecting buffer中添加FBS或BSA可以显著降低细胞死亡率至5%以下[1]。你有什么流式分选的小技巧呢?快来参与流式高手PK大赛,把你的分选小技巧分享给大家吧!还有惊喜好礼等着满满才气的你哦~
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- 2025-01-21 12:15:12霉菌培养箱用处多吗?
- 霉菌培养箱用处 霉菌培养箱是一种用于控制湿度、温度、光照等环境因素的专用设备,广泛应用于微生物学研究、药物开发、环境监测以及食品安全等多个领域。它的主要功能是为霉菌的生长提供理想的环境,以便进行精确的实验观察和数据分析。随着科技进步,霉菌培养箱的使用范围不断扩展,不仅限于实验室,还在生产过程中扮演着重要角色。本文将深入探讨霉菌培养箱的多种用处,帮助读者更好地了解其应用价值。 1. 微生物学研究中的应用 霉菌培养箱广泛的应用之一是在微生物学研究中。许多微生物的生长、繁殖与霉菌密切相关,研究人员通常通过控制培养环境来分析霉菌的生长特性。例如,在药物开发中,霉菌培养箱能够模拟不同的温湿度条件,研究人员利用这些条件观察霉菌的反应,为新药的研发提供基础数据。通过控制实验环境,霉菌培养箱能够帮助科研人员深入理解霉菌的代谢过程,从而为微生物学的进展作出贡献。 2. 食品行业中的应用 霉菌培养箱在食品行业的应用也非常广泛,尤其是在食品安全和质量控制方面。在食品加工过程中,霉菌的存在可能导致食品变质,甚至对人类健康造成威胁。霉菌培养箱能够提供模拟的环境,用于检测和评估食品中可能存在的霉菌种类。通过定期对食品样品进行培养分析,食品生产商可以在早期发现霉菌污染,并采取有效措施加以防范,确保食品的安全性与品质。 3. 药品开发与质量控制 在制药行业,霉菌培养箱也发挥着重要作用。某些药物的生产过程可能涉及霉菌的培养和筛选,以确保药物的有效性和稳定性。通过精确控制培养箱内的环境参数,药品制造商可以对霉菌的生长过程进行有效监控,并确保所培养的霉菌种类符合要求。霉菌培养箱还可用于药品的稳定性测试,模拟不同的环境变化对药品质量的影响,从而为药品质量控制提供数据支持。 4. 环境监测与污染控制 随着环境污染问题的加剧,霉菌培养箱在环境监测中的作用日益重要。霉菌在自然环境中广泛分布,对空气、水源及土壤等环境质量产生重要影响。利用霉菌培养箱,研究人员可以模拟污染环境,评估霉菌在不同污染物条件下的生长情况。例如,空气中的霉菌浓度较高时,可能会导致健康问题,培养箱可以帮助研究人员深入分析污染源与霉菌生长之间的关系,从而为环境治理和公共健康管理提供科学依据。 5. 教育培训中的作用 霉菌培养箱在教育培训领域也有着重要的作用。在微生物学课程或实验课上,学生通过霉菌培养箱进行实际操作,能够掌握霉菌的生长原理及其培养方法。教师可以利用培养箱控制环境因素,让学生通过观察霉菌的生长情况,进一步理解微生物的基本知识。实验教学不仅帮助学生加深对理论的理解,还为他们提供了实践经验,促进了教学与科研的结合。 6. 工业生产中的应用 霉菌培养箱还广泛应用于工业生产中,尤其是在发酵生产过程中。许多工业产品,如酿酒、酱油、醋等,都需要特定种类的霉菌进行发酵培养。在此过程中,霉菌培养箱提供了一个精确控制的环境,保证霉菌能够在佳条件下生长繁殖,从而提高产品的质量和产量。 结语 霉菌培养箱作为一种专业设备,在多个领域中具有不可替代的重要作用。通过精确控制环境因素,霉菌培养箱能够为微生物学研究、食品安全、药品开发、环境监测等方面提供稳定、可重复的实验条件。随着技术的不断发展,霉菌培养箱的应用前景也将更加广阔,它将在更多领域发挥出重要作用,推动科学研究和产业发展迈向新的高度。
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